| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略词 | 第11-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-27页 |
| 1.1 HS的结构与功能 | 第12-18页 |
| 1.1.1 HS的生物合成与调控 | 第12-13页 |
| 1.1.2 HS的生理功能 | 第13-15页 |
| 1.1.3 HS与疾病的关系 | 第15-18页 |
| 1.2 以HS为靶点的生物学活性研究 | 第18-20页 |
| 1.2.1 外源性HS结构类似物对HS功能的影响 | 第18-19页 |
| 1.2.2 以heparanase为靶点的酶抑制剂对HS功能的影响 | 第19-20页 |
| 1.2.3 HS结构改变对HS功能的影响 | 第20页 |
| 1.3 HS类似物与趋化因子相互作用 | 第20-23页 |
| 1.3.1 HS与趋化因子 | 第20-21页 |
| 1.3.2 趋化因子在肿瘤中的作用 | 第21-23页 |
| 1.3.3 HS类似物与趋化因子相互作用对肿瘤的调节 | 第23页 |
| 1.4 HS类似物在免疫调节中的作用 | 第23-24页 |
| 1.4.1 多糖与免疫调节 | 第23-24页 |
| 1.4.2 HS类似物与免疫调节 | 第24页 |
| 1.5 本论文研究思路与内容 | 第24-27页 |
| 1.5.1 立题背景与研究思路 | 第24-25页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第25-27页 |
| 第二章 类硫酸乙酰肝素多糖的制备及表征 | 第27-40页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第27-29页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-33页 |
| 2.3.1 K5多糖的发酵与分离、纯化 | 第29-30页 |
| 2.3.2 K5多糖硫酸化衍生物的制备 | 第30-31页 |
| 2.3.3 K5多糖及其硫酸化衍生物的表征 | 第31-33页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第33-39页 |
| 2.4.1 K5多糖的纯化分析 | 第33-34页 |
| 2.4.2 K5多糖及其硫酸化衍生物的化学性质分析 | 第34-35页 |
| 2.4.3 K5多糖硫酸化衍生物硫酸化情况分析 | 第35-37页 |
| 2.4.4 K5多糖及其硫酸化衍生物FT-IR、NMR分析 | 第37-39页 |
| 2.5 本章小结 | 第39-40页 |
| 第三章 类硫酸乙酰肝素多糖抗肿瘤活性研究 | 第40-48页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 实验材料 | 第40-41页 |
| 3.2.1 实验细胞 | 第40页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第40-41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-43页 |
| 3.3.1 细胞准备及培养 | 第41-42页 |
| 3.3.2 细胞毒性实验 | 第42页 |
| 3.3.3 细胞粘附实验 | 第42-43页 |
| 3.3.4 细胞迁移实验 | 第43页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第43-47页 |
| 3.4.1 K5多糖及其硫酸化衍生物对黑色素瘤细胞增殖的影响 | 第43-44页 |
| 3.4.2 K5多糖及其硫酸化衍生物对黑色素瘤细胞粘附的影响 | 第44-46页 |
| 3.4.3 K5多糖及其硫酸化衍生物对黑色素瘤细胞体外迁移的影响 | 第46-47页 |
| 3.5 本章小结 | 第47-48页 |
| 第四章 类硫酸乙酰肝素多糖抗肿瘤活性的作用机制初探 | 第48-61页 |
| 4.1 引言 | 第48页 |
| 4.2 实验材料 | 第48-49页 |
| 4.2.1 实验细胞 | 第48页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第48-49页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第49页 |
| 4.3 实验方法 | 第49-51页 |
| 4.3.1 CXCL12诱导肿瘤细胞生物学行为实验 | 第49-50页 |
| 4.3.2 细胞免疫荧光观察CXCR4蛋白的表达情况 | 第50页 |
| 4.3.3 流式细胞术分析CXCR4蛋白表达情况 | 第50页 |
| 4.3.4 Western blotting检测相关蛋白的表达 | 第50-51页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第51-60页 |
| 4.4.1 CXCL12对黑色素瘤细胞生长的影响 | 第51-52页 |
| 4.4.2 K5多糖及其硫酸化衍生物对CXCL12介导的黑色素瘤细胞生物学行为的影响 | 第52-56页 |
| 4.4.3 K5多糖及其硫酸化衍生物对CXCR4蛋白表达和内化的影响 | 第56-58页 |
| 4.4.4 K5多糖及其硫酸化衍生物对CXCL12/CXCR4生物轴下游信号蛋白的影响 | 第58-60页 |
| 4.5 本章小结 | 第60-61页 |
| 第五章 类硫酸乙酰肝素多糖免疫调节活性研究 | 第61-78页 |
| 5.1 引言 | 第61页 |
| 5.2 实验材料 | 第61-62页 |
| 5.2.1 实验细胞 | 第61页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第61-62页 |
| 5.2.3 实验仪器 | 第62页 |
| 5.3 实验方法 | 第62-65页 |
| 5.3.1 巨噬细胞培养 | 第62-63页 |
| 5.3.2 巨噬细胞毒性实验 | 第63页 |
| 5.3.3 巨噬细胞中性红吞噬实验 | 第63页 |
| 5.3.4 Griess法测定一氧化氮 (nitric oxide, NO) 浓度 | 第63页 |
| 5.3.5 ELISA法测定巨噬细胞释放细胞因子水平 | 第63-64页 |
| 5.3.6 RT-PCR法检测巨噬细胞中iNOS、TNF-α 和IL-1β 基因表达水平 | 第64页 |
| 5.3.7 巨噬细胞细胞毒活性检测 | 第64页 |
| 5.3.8 小鼠脾淋巴细胞的分离制备 | 第64-65页 |
| 5.3.9 CCK-8 法检测脾淋巴细胞增殖 | 第65页 |
| 5.3.10 ELISA法测定脾淋巴细胞释放免疫球蛋白、细胞因子水平 | 第65页 |
| 5.3.11 NK细胞毒活性检测 | 第65页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第65-76页 |
| 5.4.1 K5多糖及其硫酸化衍生物内毒素检测 | 第65-66页 |
| 5.4.2 K5多糖及其硫酸化衍生物对巨噬细胞的免疫调节活性 | 第66-72页 |
| 5.4.3 K5多糖及其硫酸化衍生物对脾淋巴细胞的免疫调节活性 | 第72-76页 |
| 5.5 本章小结 | 第76-78页 |
| 第六章 类硫酸乙酰肝素多糖免疫调节活性的作用机制初探 | 第78-88页 |
| 6.1 引言 | 第78-79页 |
| 6.2 实验材料 | 第79-80页 |
| 6.2.1 实验细胞 | 第79页 |
| 6.2.2 实验试剂 | 第79页 |
| 6.2.3 实验仪器 | 第79-80页 |
| 6.3 实验方法 | 第80页 |
| 6.3.1 巨噬细胞培养 | 第80页 |
| 6.3.2 流式细胞术分析TLR4蛋白表达情况 | 第80页 |
| 6.3.3 Western blotting检测MAPK、NF-κB通路相关蛋白的表达 | 第80页 |
| 6.3.4 Griess法测定TLR4抑制剂、MAPK抑制剂、NF-κB抑制剂对多糖刺激的NO释放的影响 | 第80页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第80-87页 |
| 6.4.1 K5多糖及其硫酸化衍生物对RAW264.7 细胞TLR4表达的影响 | 第80-81页 |
| 6.4.2 TLR4受体拮抗剂对K5-OS_2诱导巨噬细胞释放NO的影响 | 第81-82页 |
| 6.4.3 K5多糖及其硫酸化衍生物对MAPK通路的影响 | 第82-84页 |
| 6.4.4 MAPK抑制剂对K5-OS_2诱导巨噬细胞释放NO的影响 | 第84-85页 |
| 6.4.5 K5多糖及其硫酸化衍生物对NF-κB通路的影响 | 第85-86页 |
| 6.4.6 NF-κB抑制剂对K5-OS_2诱导巨噬细胞释放NO的影响 | 第86-87页 |
| 6.5 本章小结 | 第87-88页 |
| 主要结论与展望 | 第88-90页 |
| 主要结论 | 第88页 |
| 展望 | 第88-90页 |
| 论文主要创新点 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-105页 |
| 附录: 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第105页 |
