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“脑神经血管单元”体外模型的构建及梓葛冻干粉对其缺氧缺糖损伤的保护研究

中英文缩略词对照表第1-7页
中文摘要第7-10页
英文摘要第10-13页
前言第13-14页
研究内容一 "脑血管神经单元"体外模型的构建第14-40页
 实验一 3种脑细胞的分离纯化和鉴定培养第14-29页
  1.实验材料第14-16页
   ·实验药品和试剂第14-15页
   ·主要试剂的配制第15页
   ·实验仪器第15-16页
   ·实验动物第16页
  2.实验方法第16-22页
     ·脑皮层神经元的原代培养与鉴定第16-18页
     ·脑皮层神经元的原代培养第16-17页
       ·形态学观察第17页
     ·细胞生长曲线绘制第17-18页
       ·脑皮层神经元细胞的鉴定第18页
   ·星形胶质细胞的体外培养和鉴定第18-20页
     ·脑皮层神经元的原代培养第18-19页
       ·形态学观察第19页
       ·细胞生长曲线绘制第19页
       ·脑皮层星形胶质细胞的鉴定第19-20页
     ·血管内皮细胞的体外培养和鉴定第20-22页
     ·脑皮层内皮细胞的原代培养第20页
       ·形态学观察第20页
       ·细胞生长曲线绘制第20页
       ·脑皮层血管内皮细胞的鉴定第20-22页
  3.结果第22-24页
   ·脑皮层神经元细胞培养结果第22页
   ·脑皮层星形胶质细胞培养结果第22-23页
   ·脑皮层血管内皮细胞培养结果第23-24页
  4.讨论第24页
  5.小结第24-29页
 实验二 3种脑细胞体外共培养及"脑神经血管单元"模型鉴定第29-40页
  1.实验材料第29-32页
   ·实验药品和试剂第29-30页
   ·主要试剂的配制第30-31页
   ·实验仪器第31-32页
   ·动物第32页
  2.实验方法第32-36页
   ·3细胞模型构建于细胞共培养池内第32-33页
     ·神经元细胞的种植第32页
     ·星型胶质细胞的种植第32-33页
     ·脑微血管内皮细胞种植第33页
   ·形态学观察第33页
   ·模型的鉴定第33-35页
     ·4h渗滤试验和常规HE染色初步鉴定细胞共培养模型第33-34页
     ·荧光素钠和HRP通透性试验测定细胞共培养模型通透性第34页
     ·跨细胞间电阻(TEER)的测量第34页
     ·透射电镜检测精密连接第34-35页
     ·γ-谷胺酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GT)定量测定第35页
     ·免疫细胞化学Pg-P的检测第35页
   ·统计学分析第35-36页
  3.结果第36-38页
   ·体外3种脑细胞共培养后细胞生长情况第36页
   ·4h渗漏试验检测细胞通透性结果第36页
   ·荧光素钠和HRP通透性试验测定细胞共培养模型通透性结果第36-37页
   ·透射电镜检测血管内皮细胞间紧密连接结果第37页
   ·细胞跨膜电阻(TEER)测试结果第37-38页
   ·γ-谷氨酰胺转肽酶(γ-GT)活性测定结果第38页
   ·Pg-P测定结果第38页
  4.讨论第38-39页
  5.小结第39-40页
研究内容二、梓葛冻干粉对缺氧缺糖损伤的脑神经血管单元的保护作用第40-60页
 1.实验材料第40-44页
   ·实验药品和试剂配制第40-41页
   ·主要试剂的配制第41-43页
   ·实验仪器第43-44页
   ·动物第44页
 2.实验方法第44-50页
   ·缺氧缺糖再复氧模型的制作第44-45页
   ·细胞电阻TEER的变化第45页
   ·ZO-1免疫细胞化学染色第45-46页
   ·细胞Y-GT活力测定方法第46页
   ·细胞培养上清中TNF-α和NGFβ的检测(ELISA方法)第46-47页
   ·细胞培上清NO和LDH以及细胞MDA和SOD的检测第47页
   ·细胞相关蛋白westerblot检测第47-50页
 3.结果第50-58页
   ·细胞电阻TEER结果第50页
   ·血管内皮细胞膜ZO-1蛋白免疫细胞化学染色第50-51页
   ·细胞γ-谷氨酰胺转肽酶(γ-GT)活性测定结果第51页
   ·ELISA方法检测细胞培养上清中TNF-α和NGFβ的结果第51-52页
   ·细胞培上清NO和LDH以及细胞MDA和SOD的检测结果第52-53页
   ·westerblot方法检测相关蛋白结果第53-58页
 4.讨论第58-59页
 5.小结第59-60页
全文总结第60-62页
思考与展望第62-63页
参考文献第63-65页
综述第65-87页
 参考文献第82-87页
致谢第87-88页
攻读硕士学位期间科研工作汇报第88-89页

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