| 缩略词表 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-23页 |
| 1 MDCK细胞培养的在流感疫苗生产中的应用 | 第14-17页 |
| 1.1 MDCK细胞 | 第14页 |
| 1.2 MDCK细胞的培养 | 第14-16页 |
| 1.3 MDCK细胞在流感疫苗生产中的应用 | 第16-17页 |
| 2 疫苗中宿主细胞蛋白研究进展 | 第17-20页 |
| 2.1 通用型与工艺特异性宿主细胞蛋白 | 第17-18页 |
| 2.2 宿主细胞蛋白在生物制品中的风险 | 第18-19页 |
| 2.3 宿主细胞蛋残留的检测和控制 | 第19-20页 |
| 3 酶联免疫吸附试验方法研究进展 | 第20-22页 |
| 3.1 ELISA检测方法的原理 | 第20页 |
| 3.2 ELISA检测方法的基本类型 | 第20-22页 |
| 3.2.1 斑点-ELISA检测方法 | 第20-21页 |
| 3.2.2 间接ELISA检测方法 | 第21页 |
| 3.2.3 竞争ELISA检测方法 | 第21页 |
| 3.2.4 捕捉ELISA检测方法 | 第21页 |
| 3.2.5 双抗体夹心ELISA检测方法 | 第21-22页 |
| 4 本论文研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 MDCK细胞蛋白的制备 | 第23-32页 |
| 1 材料及仪器设备 | 第23-25页 |
| 1.1 材料和试剂 | 第23页 |
| 1.2 试剂配制 | 第23-25页 |
| 1.2.1 蛋白含量检测所需溶液配制方法 | 第23-24页 |
| 1.2.2 SDS-PAGE所需溶液的配制方法 | 第24-25页 |
| 1.3 仪器设备 | 第25页 |
| 2 试验步骤及方法 | 第25-28页 |
| 2.1 MDCK细胞蛋白的制备 | 第25-27页 |
| 2.1.1 MDCK细胞复苏 | 第26页 |
| 2.1.2 细胞传代 | 第26页 |
| 2.1.3 收集及处理细胞 | 第26-27页 |
| 2.2 MDCK细胞蛋白含量测定(LOWRY法) | 第27页 |
| 2.2.1 绘制标准曲线 | 第27页 |
| 2.2.2 MDCK细胞蛋白含量测定 | 第27页 |
| 2.3 MDCK细胞蛋白的鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3.1 MDCK细胞蛋白SDS-PAGE | 第27-28页 |
| 2.3.2 染色和脱色 | 第28页 |
| 3 试验结果 | 第28-30页 |
| 3.1 MDCK细胞蛋白的制备 | 第28页 |
| 3.2 MDCK细胞蛋白检测 | 第28-30页 |
| 3.2.1 蛋白质定量标准曲线 | 第28-29页 |
| 3.2.2 MDCK细胞蛋白含量测定(LOWRY法) | 第29-30页 |
| 3.2.3 MDCK细胞蛋白的鉴定 | 第30页 |
| 4 小结 | 第30-32页 |
| 第三章 MDCK细胞蛋白多克隆抗体的制备及鉴定 | 第32-45页 |
| 1 材料及仪器设备 | 第32-34页 |
| 1.1 试验动物 | 第32页 |
| 1.2 材料及试剂 | 第32页 |
| 1.3 试剂配制 | 第32-34页 |
| 1.3.1 ELISA实验所需试剂 | 第32-33页 |
| 1.3.2 亲和层析所需试剂 | 第33页 |
| 1.3.3 酶标抗体所用试剂 | 第33-34页 |
| 1.4 仪器设备 | 第34页 |
| 2 试验步骤及方法 | 第34-40页 |
| 2.1 抗MDCK细胞蛋白抗体的制备 | 第34-35页 |
| 2.1.1 动物准备 | 第34-35页 |
| 2.1.2 抗原乳化 | 第35页 |
| 2.2 免疫程序 | 第35-36页 |
| 2.2.1 首次免疫 | 第35-36页 |
| 2.2.2 第二次免疫 | 第36页 |
| 2.2.3 第三次免疫 | 第36页 |
| 2.2.4 第四次免疫 | 第36页 |
| 2.3 间接ELISA检测多克隆抗体效价 | 第36-37页 |
| 2.4 抗血清的收集与保存 | 第37-38页 |
| 2.5 多克隆抗体的纯化 | 第38-39页 |
| 2.5.1 (NH4)_2SO_4沉淀法纯化 | 第38页 |
| 2.5.2 亲和层析纯化 | 第38-39页 |
| 2.6 多克隆抗体的鉴定 | 第39-40页 |
| 2.6.1 双向琼脂免疫扩散 | 第39页 |
| 2.6.2 多克隆抗体的Western blot鉴定 | 第39-40页 |
| 2.7 多克隆抗体特异性检测 | 第40页 |
| 2.8 酶标兔抗MDCK抗体的制备 | 第40页 |
| 3 结果 | 第40-43页 |
| 3.1 多克隆抗体的鉴定 | 第40-42页 |
| 3.1.1 ELISA方法测定抗体效价 | 第41页 |
| 3.1.2 双向琼脂免疫扩散 | 第41-42页 |
| 3.2 多克隆抗体的纯化 | 第42页 |
| 3.3 多克隆抗体特异性检测 | 第42-43页 |
| 4 小结 | 第43-45页 |
| 第四章 MDCK细胞蛋白双抗体夹心ELISA方法的建立 | 第45-59页 |
| 1 材料及仪器设备 | 第45页 |
| 1.1 材料及试剂 | 第45页 |
| 1.2 仪器设备 | 第45页 |
| 2 试验步骤及方法 | 第45-49页 |
| 2.1 MDCK细胞蛋白双抗体夹心ELISA方法的建立 | 第45-47页 |
| 2.1.1 双抗体夹心ELISA方法的初步建立 | 第45-46页 |
| 2.1.2 双抗体夹心ELISA各条件的优化 | 第46-47页 |
| 2.1.2.1 最佳抗体包被浓度的确定 | 第46-47页 |
| 2.1.2.2 最佳封闭液的筛选 | 第47页 |
| 2.1.2.3 最佳酶标抗体稀释度的确定 | 第47页 |
| 2.2 建立的双抗体夹心ELISA方法的评价 | 第47-48页 |
| 2.2.1 MDCK细胞蛋白含量测定标准曲线 | 第47-48页 |
| 2.2.2 灵敏性验证 | 第48页 |
| 2.2.3 特异性验证 | 第48页 |
| 2.2.4 稳定性验证 | 第48页 |
| 2.2.5 重复性验证 | 第48页 |
| 2.3 双抗体夹心ELISA方法的应用 | 第48-49页 |
| 3 结果 | 第49-58页 |
| 3.1 双抗体夹心ELISA方法的初步建立 | 第49页 |
| 3.2 双抗体夹心ELISA各条件的优化 | 第49-51页 |
| 3.2.1 最佳抗体包被浓度的确定 | 第49-50页 |
| 3.2.2 最佳封闭液的筛选 | 第50页 |
| 3.2.3 最佳酶标抗体稀释度的确定 | 第50-51页 |
| 3.3 建立的双抗体夹心ELISA方法的评价 | 第51-56页 |
| 3.3.1 MDCK细胞蛋白含量测定标准曲线 | 第51-52页 |
| 3.3.2 灵敏性验证 | 第52-53页 |
| 3.3.3 特异性验证 | 第53页 |
| 3.3.4 稳定性验证 | 第53-55页 |
| 3.3.5 重复性验证 | 第55-56页 |
| 3.4 双抗体夹心ELISA方法的应用 | 第56-58页 |
| 4 小结 | 第58-59页 |
| 第五章 全文结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
