| 摘要 | 第6-7页 |
| 文献综述 | 第7-12页 |
| 1 C-C趋化因子受体4及其相关配体的研究进展 | 第7-8页 |
| 1.1 C-C趋化因子受体4 | 第7页 |
| 1.2 巨噬细胞源趋化因子 | 第7-8页 |
| 1.3 胸腺活化调节因子 | 第8页 |
| 2 调节性T细胞 | 第8-9页 |
| 2.1 调节性T细胞简介 | 第8-9页 |
| 2.2 调节性T细胞与C-C趋化因子受体4 | 第9页 |
| 3 免疫毒素简述 | 第9-10页 |
| 4 毕赤酵母表达系统的简述 | 第10-11页 |
| 5 试验设计 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 试验部分 | 第13-44页 |
| 1 试验材料 | 第13-17页 |
| 1.1 细胞系 | 第13页 |
| 1.2 主要试剂 | 第13-14页 |
| 1.3 主要仪器与设备 | 第14-15页 |
| 1.4 试剂配制 | 第15-17页 |
| 1.5 数据处理软件 | 第17页 |
| 2 试验方法 | 第17-25页 |
| 2.1 Anti-human CCL22和Anti-human CCL17免疫毒素的表达 | 第17-20页 |
| 2.1.1 目的基因的获取 | 第17-19页 |
| 2.1.2 目的基因向酵母感受态细胞中的转化 | 第19页 |
| 2.1.3 大批量表达 | 第19-20页 |
| 2.2 蛋白质分离纯化 | 第20-21页 |
| 2.2.1 第一步纯化(镍柱纯化) | 第20页 |
| 2.2.2 第二步纯化(离子柱纯化) | 第20-21页 |
| 2.3 BCA法测蛋白质浓度 | 第21-22页 |
| 2.4 Anti-human CCL22及Anti-human CCL17免疫毒素体外功能试验 | 第22-23页 |
| 2.4.1 Anti-human CCL22免疫毒素粘附试验 | 第22-23页 |
| 2.4.2 Anti-human CCL17免疫毒素粘附试验(步骤同2.4.1) | 第23页 |
| 2.5 CCRF-CEM肿瘤细胞系的放射性同位素蛋白合成抑制试验 | 第23-24页 |
| 2.6 Anti-human CCL22免疫毒素对肿瘤细胞活力抑制试验 | 第24-25页 |
| 2.7 Anti-human CCL17免疫毒素对肿瘤细胞活力抑制试验(步骤同2.6) | 第25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-37页 |
| 3.1 PCR结果 | 第25-26页 |
| 3.2 重组基因的双酶切验证 | 第26-27页 |
| 3.3 免疫毒素蛋白纯化结果 | 第27-28页 |
| 3.4 BCA法检测蛋白浓度 | 第28页 |
| 3.5 Anti-human CCL22免疫毒素黏附试验流式细胞技术分析结果 | 第28-31页 |
| 3.6 Anti-human CCL22免疫毒素粘附性解离常数(Kd)的计算 | 第31页 |
| 3.7 Anti-human CCL17免疫毒素黏附试验流式细胞技术分析结果 | 第31-34页 |
| 3.8 Anti-human CCL17免疫毒素粘附性解离常数(Kd)的计算 | 第34页 |
| 3.9 CCRF-CEM肿瘤细胞系的放射性同位素蛋白合成抑制试验 | 第34-35页 |
| 3.10 Anti-human CCL22免疫毒素对肿瘤细胞活力抑制试验 | 第35-36页 |
| 3.11 Anti-human CCL17免疫毒素对肿瘤细胞活力抑制试验 | 第36-37页 |
| 4 分析和讨论 | 第37-42页 |
| 4.1 免疫毒素的表达和提纯 | 第37-38页 |
| 4.2 蛋白标记生物素对免疫毒素的标记 | 第38页 |
| 4.3 免疫毒素体外功能的验证 | 第38-42页 |
| 4.3.1 Anti-human CCL22免疫毒素粘附试验 | 第39-40页 |
| 4.3.2 Anti-human CCL17免疫毒素粘附试验 | 第40页 |
| 4.3.3 CCRF-CEM肿瘤细胞系的放射性同位素蛋白合成抑制试验 | 第40-41页 |
| 4.3.4 Anti-human CCL22免疫毒素对肿瘤细胞活力抑制能力试验 | 第41页 |
| 4.3.5 Anti-human CCL17免疫毒素对肿瘤细胞活力抑制能力试验 | 第41-42页 |
| 5 全文结论 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| Abstract | 第48页 |
| 致谢 | 第50页 |
