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稳定高效表达猪CD163的MARC-145细胞系的构建及其应用

中文摘要第1-10页
英文摘要第10-12页
1 前言第12-26页
   ·猪繁殖与呼吸综合征病毒病原学特性第12-16页
     ·PRRSV的生物学特性第12-13页
     ·PRRSV基因组结构第13-14页
     ·PRRSV基因组编码的蛋白第14-15页
     ·PRRSV的致病机制第15-16页
   ·PRRSV引起宿主的免疫应答第16-17页
     ·先天性免疫第16页
     ·获得性免疫第16-17页
   ·PRRSV细胞受体研究进展第17-22页
     ·病毒受体的概述第17页
     ·病毒侵入宿主细胞的过程第17-18页
     ·细胞上的PRRSV受体第18-21页
     ·构建表达CD163蛋白的细胞系研究进展第21-22页
   ·PRRS疫苗研究进展第22-24页
     ·灭活疫苗第22页
     ·弱毒疫苗第22-24页
     ·基因工程疫苗第24页
   ·本研究的目的和意义第24-26页
2 材料和方法第26-40页
   ·材料第26-27页
     ·细胞、毒株及载体第26页
     ·主要试剂第26页
     ·主要仪器设备第26-27页
   ·方法第27-40页
     ·PAM细胞的分离培养及总RNA的提取第27-28页
     ·pCD163基因的克隆第28-31页
     ·真核表达载体pCI-pCD163的构建第31-33页
     ·MARC-145细胞G418耐受性测试第33页
     ·稳定高效表达pCD163的MARC-145细胞系的构建第33-34页
     ·pCD163-MARC细胞系的鉴定第34-37页
     ·pCD163-MARC细胞系增殖PRRSV能力的测定第37-38页
     ·pCD163-MARC细胞系的应用第38-40页
3 结果与分析第40-45页
   ·pCD163基因的克隆第40页
   ·真核表达载体pCI-pCD163的构建及鉴定第40-41页
   ·稳定表达猪CD163蛋白的MARC-145细胞系的构建及鉴定第41-42页
     ·pCD163-MARC细胞系的构建第41页
     ·IFA检测pCD163-MARC细胞系中CD163的表达情况第41-42页
     ·Western blot检测pCD163-MARC细胞系中CD163表达情况第42页
   ·pCD163-MARC细胞系增殖PRRSV能力的测定第42-44页
     ·pCD163-MARC和MARC-145细胞增殖PRRSV的生长曲线测定第42-43页
     ·pCD163-MARC和MARC-145细胞增殖PRRSV的RNA测定第43-44页
   ·pCD163-MARC细胞系的应用第44-45页
     ·临床样品PRRSV的分离第44页
     ·PRRS疫苗毒的初步生产第44-45页
4 讨论第45-47页
5 结论第47-48页
6 参考文献第48-55页
7 附录第55-57页
8 致谢第57-58页
9 论文发表情况第58页

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