摘要 | 第1-8页 |
Abstract | 第8-10页 |
第一部分 背景介绍 | 第10-16页 |
1 猪瘟(Classical swine fever) | 第10页 |
2 猪瘟病毒 | 第10-13页 |
3 猪瘟病毒C蛋白的主要功能 | 第13-15页 |
4 研究目的和意义 | 第15-16页 |
第二部分 猪瘟病毒蛋白真核表达载体的构建及其表达检测 | 第16-48页 |
1 材料 | 第16-23页 |
·载体、菌株和细胞系 | 第16页 |
·主要试剂 | 第16-17页 |
·溶液配制 | 第17-22页 |
·主要仪器设备 | 第22-23页 |
2 方法 | 第23-41页 |
·引物的设计与合成 | 第23-24页 |
·重组质粒的构建与提取 | 第24-37页 |
·细胞的复苏与培养 | 第37-38页 |
·细胞的转染 | 第38-39页 |
·Western Blot | 第39-41页 |
3 结果 | 第41-47页 |
·猪瘟病毒蛋白真核表达载体的构建与鉴定 | 第41-46页 |
·猪瘟病毒蛋白的真核表达与检测 | 第46-47页 |
4 结论 | 第47-48页 |
第三部分 猪瘟病毒蛋白对其 3’UTR功能发挥的影响 | 第48-53页 |
1 材料 | 第48页 |
·载体、质粒和细胞系 | 第48页 |
·主要试剂 | 第48页 |
·主要仪器设备 | 第48页 |
2 方法 | 第48-49页 |
·细胞的复苏与培养 | 第48页 |
·细胞转染 | 第48-49页 |
·双荧光素酶相对活性的检测 | 第49页 |
3 结果 | 第49-51页 |
·猪瘟病毒结构蛋白对其 3’UTR功能发挥的影响 | 第49-50页 |
·猪瘟病毒非结构蛋白对其 3’UTR功能发挥的影响 | 第50-51页 |
4 讨论 | 第51-53页 |
第四部分 猪瘟病毒C蛋白对其 3’UTR功能发挥的影响 | 第53-64页 |
1 材料 | 第53页 |
2 方法 | 第53-56页 |
·猪瘟病毒 3’UTR及C蛋白的结构及功能分析 | 第53-54页 |
·引物的设计与合成 | 第54页 |
·pCMV-C- deletion和pMIR105157重组质粒的构建与提取 | 第54-55页 |
·细胞的复苏与培养 | 第55-56页 |
·细胞转染 | 第56页 |
·western blot | 第56页 |
·双荧光素酶活性检测 | 第56页 |
3 结果 | 第56-62页 |
·猪瘟病毒 3’UTR SL-3 区域荧光素酶表达载体的构建与鉴定 | 第56-57页 |
·猪瘟病毒C蛋白突变载体的构建、表达与检测 | 第57页 |
·猪瘟病毒C蛋白对其 3’UTR功能的影响 | 第57-62页 |
4 讨论 | 第62-64页 |
参考文献 | 第64-68页 |
附录 | 第68-75页 |
致谢 | 第75页 |