| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 前言 | 第12-15页 |
| 材料和方法 | 第15-40页 |
| 1. 实验材料与试剂 | 第15-18页 |
| ·仪器设备 | 第15-16页 |
| ·试剂来源 | 第16-18页 |
| 2. 研究方法 | 第18-40页 |
| ·细胞培养 | 第18页 |
| ·咖啡因及其他药物配制 | 第18-19页 |
| ·cDNA克隆和探针构建 | 第19-21页 |
| ·探针构建原理 | 第19-20页 |
| ·探针质粒的构建 | 第20页 |
| ·定量和半定量评估 | 第20-21页 |
| ·质粒转化、扩增和提取 | 第21-25页 |
| ·质粒转化与扩增 | 第21-23页 |
| ·质粒提取 | 第23-25页 |
| ·质粒浓度测量 | 第25页 |
| ·质粒转染及共转染 | 第25-26页 |
| ·质粒转染 | 第25-26页 |
| ·质粒共转染 | 第26页 |
| ·蛋白质提取和浓度测量 | 第26-27页 |
| ·总蛋白的提取 | 第26-27页 |
| ·蛋白含量的测量——BCA法 | 第27页 |
| ·免疫荧光 | 第27-28页 |
| ·总RNA提取 | 第28-30页 |
| ·总RNA提取 | 第28-29页 |
| ·RNA浓度测量 | 第29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第29-30页 |
| ·PCR | 第30-33页 |
| ·逆转录 | 第30-31页 |
| ·PCR扩增目的序列 | 第31-32页 |
| ·目的片段纯化 | 第32-33页 |
| ·酶切和连接 | 第33-34页 |
| ·双酶切 | 第33页 |
| ·连接 | 第33-34页 |
| ·激光共聚焦 | 第34-39页 |
| ·FRET SE | 第34-36页 |
| ·FRET AB | 第36-37页 |
| ·FRAP | 第37-39页 |
| ·数据处理 | 第39-40页 |
| 结果 | 第40-47页 |
| 第一部分 荧光张力探针设计及有效性检测 | 第40-42页 |
| 1、cpstFRET模块和actin、spectrin荧光张力检测探针构建 | 第40页 |
| 2、FRAP和FLIP验证探针有效性和准确性 | 第40-41页 |
| 3、actinM和spectrinM探针的3D成像 | 第41页 |
| 4、低渗条件下渗透压对actin蛋白的影响 | 第41-42页 |
| 5、钙信号对微丝张力及Spectrin牵拉力的作用 | 第42页 |
| 第二部分 微丝张力调控神经元极化、轴突生长和再生机制 | 第42-44页 |
| 1、NGF通过talin上调胞内微丝结构张力,促进神经元极化和轴突生长 | 第42-43页 |
| 2、胶质瘢痕抑制因子和E-cadherin部分下调微丝张力,抑制轴突生长和再生 | 第43-44页 |
| 3、Talin/vinculin和瘢痕抑制因子调控神经元胞内张力机制 | 第44页 |
| 第三部分 抗肿瘤药物对actin和spectrin蛋白机械应力的作用研究 | 第44-47页 |
| 1、维拉帕米 | 第44-45页 |
| 2、长春碱 | 第45页 |
| 3、喜树碱 | 第45-46页 |
| 4、紫杉醇 | 第46-47页 |
| 讨论 | 第47-51页 |
| 小结 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 实验结果及中文注释 | 第57-66页 |
| 附录(一) 综述 | 第66-88页 |
| 参考文献 | 第83-88页 |
| 附录(二) 缩略词表 | 第88-90页 |
| 附录(三) 发表文章 | 第90页 |
| 附录(四) 获得的荣誉 | 第90-91页 |
| 附录(五) 致谢 | 第91页 |
