| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| ·引言 | 第13页 |
| ·Bt的研究进展 | 第13-17页 |
| ·Bt概述 | 第13-14页 |
| ·Bt毒素的结构和功能 | 第14-15页 |
| ·Bt毒蛋白的作用机制 | 第15-17页 |
| ·昆虫中肠Bt受体蛋白的研究 | 第17-18页 |
| ·Bt应用进展及抗性研究现状 | 第18-21页 |
| ·Bt应用进展 | 第18-19页 |
| ·Bt抗性机制 | 第19-21页 |
| ·小菜蛾Bt抗性的研究进展 | 第21页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| ·研究内容 | 第22-23页 |
| ·技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 Polycalin基因克隆 | 第24-44页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·供试昆虫 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·培养基及试剂的配制 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-33页 |
| ·总RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·cDNA的合成 | 第26-27页 |
| ·5'RACE和 3'RACE cDNA模板的制备 | 第27-28页 |
| ·引物的设计 | 第28-29页 |
| ·PCR反应体系和程序 | 第29-31页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第31页 |
| ·连接反应 | 第31-32页 |
| ·转化 | 第32页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第32-33页 |
| ·序列分析 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-42页 |
| ·小菜蛾总RNA提取 | 第33-34页 |
| ·普通PCR和RACE PCR结果 | 第34-35页 |
| ·Polycalin基因的序列分析 | 第35-39页 |
| ·序列同源性分析 | 第39-42页 |
| ·系统发育分析 | 第42页 |
| ·结论与讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 小菜蛾Polycalin基因的时空表达 | 第44-51页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·供试昆虫 | 第44页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-46页 |
| ·小菜蛾不同发育阶段样品收集 | 第44页 |
| ·小菜蛾幼虫不同部位样品收集 | 第44页 |
| ·RNA的提取 | 第44页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第44-45页 |
| ·引物设计与合成 | 第45页 |
| ·qPCR反应 | 第45-46页 |
| ·引物扩增效率检测 | 第46页 |
| ·数据处理 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-49页 |
| ·引物的特异性和扩增效率 | 第46-48页 |
| ·Polycalin基因在小菜蛾不同发育阶段的表达 | 第48页 |
| ·Polycalin基因在小菜蛾幼虫不同部位的表达分析 | 第48-49页 |
| ·结论与讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 小菜蛾取食Cry1Ac毒素后Polycalin基因的表达量 | 第51-56页 |
| ·材料与方法 | 第51-52页 |
| ·供试昆虫及试剂 | 第51页 |
| ·Cry1Ac杀虫蛋白对小菜蛾的毒力测定 | 第51页 |
| ·收集取食不同浓度的Cry1Ac毒素小菜蛾样品 | 第51-52页 |
| ·小菜蛾幼虫RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第52页 |
| ·实时荧光定量检测 | 第52页 |
| ·数据处理 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-53页 |
| ·Cry1Ac毒素蛋白对小菜蛾幼虫的致死效果 | 第52页 |
| ·小菜蛾取食不同浓度的Cry1Ac毒素后Polycalin基因的表达量 | 第52-53页 |
| ·结论与讨论 | 第53-56页 |
| 第五章 小菜蛾中肠Polycalin蛋白的功能分析 | 第56-65页 |
| ·材料与方法 | 第56-59页 |
| ·供试昆虫 | 第56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·主要仪器 | 第56页 |
| ·试剂配制 | 第56-59页 |
| ·实验方法 | 第59-61页 |
| ·小菜蛾幼虫中肠受体蛋白BBMV的提取 | 第59页 |
| ·BBMV蛋白浓度测定 | 第59页 |
| ·BBMV蛋白的SDS-PAGE电泳分离 | 第59-60页 |
| ·Polycalin蛋白抗体的制备 | 第60页 |
| ·Polycalin蛋白的Western blot检测 | 第60页 |
| ·Polycalin蛋白的Ligand blot检测 | 第60-61页 |
| ·结果与分析 | 第61-62页 |
| ·小菜蛾中肠BBMV蛋白的SDS-PAGE分离结果 | 第61页 |
| ·Polycalin蛋白的Western blot检测结果 | 第61-62页 |
| ·Polycalin蛋白的Ligand blot检测结果 | 第62页 |
| ·结论与讨论 | 第62-65页 |
| 第六章 全文总结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 作者简介 | 第76页 |
