缩略词表 | 第1-7页 |
摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-12页 |
前言 | 第12-19页 |
1. CAGA及分型 | 第12-13页 |
·CagA蛋白 | 第12页 |
·CagA蛋白分型 | 第12-13页 |
2. CAGA进入宿主细胞后的生物学活动 | 第13-16页 |
·膜相关的生物学活动 | 第13-14页 |
·磷酸化依赖的生物学活动 | 第14-15页 |
·不依赖磷酸化的生物学活动 | 第15-16页 |
3. CAGA对宿主细胞的影响及与胃癌的关系 | 第16-18页 |
·CagA与宿主细胞“蜂鸟状”改变 | 第16-17页 |
·CagA与宿主细胞IL-8 表达 | 第17页 |
·CagA及其亚型与胃癌 | 第17-18页 |
4. 小结 | 第18-19页 |
第一章 cagA基因的优化与人工合成及其真核表达载体的构建 | 第19-36页 |
第一部分 优化菌源CAGA基因 | 第19-28页 |
1. 材料 | 第19-20页 |
·选取cagA基因序列 | 第19页 |
·软件及网址 | 第19-20页 |
2. 方法 | 第20页 |
·基因优化流程 | 第20页 |
·分析cagA GC含量 | 第20页 |
·分析cagA密码子偏性 | 第20页 |
·分析cagA隐蔽剪接位点 | 第20页 |
·分析cagA二核苷酸频率 | 第20页 |
3. 结果 | 第20-26页 |
·cagA基因序列的选择 | 第20-21页 |
·cagA NCTC11637 基因分析及优化 | 第21-25页 |
·cagA F75、cagA PNGhigh85 和cagA Shi470 基因分析及优化 | 第25-26页 |
4. 讨论 | 第26-27页 |
5. 小结 | 第27-28页 |
第二部分CAGA基因的合成与真核表达载体的构建 | 第28-36页 |
1. 材料 | 第28页 |
·菌种与质粒 | 第28页 |
·酶及生化试剂 | 第28页 |
·cagA基因片段及引物 | 第28页 |
2. 方法 | 第28-31页 |
·基因片段的扩增 | 第28-29页 |
·酶切、回收及纯化载体质粒 | 第29页 |
·各型cagAHS真核表达载体的构建及PCR验证 | 第29-30页 |
·各型pcDNA3.1-cagAHS转化E.coli DH-5α | 第30页 |
·挑选及鉴定目的重组菌 | 第30-31页 |
·各型pcDNA3.1-cagAHS质粒提取及浓度测定 | 第31页 |
3. 结果 | 第31-34页 |
·各型cagAHS基因真核表达载体的构建、PCR鉴定及基因测序 | 第31-34页 |
·各型pcDNA3.1-cagAHS质粒提取及浓度测定 | 第34页 |
4. 讨论 | 第34-35页 |
5. 小结 | 第35-36页 |
第二章 不同亚型CagA对AGS细胞形态及IL-8 表达的影响 | 第36-47页 |
1. 材料 | 第36页 |
·质粒 | 第36页 |
·试剂 | 第36页 |
2. 方法 | 第36-39页 |
·AGS细胞的复苏、培养及传代 | 第36-37页 |
·AGS细胞的瞬时转染 | 第37-38页 |
·各型cagA HS瞬时转染AGS后CagA表达水平的WB鉴定 | 第38页 |
·各型cagA HS瞬时转染AGS对细胞形态的影响 | 第38-39页 |
·各型cagA HS瞬时转染AGS对IL-8 表达量的影响 | 第39页 |
·相关数据统计学分析说明 | 第39页 |
3. 结果 | 第39-44页 |
·各型cagA HS重组质粒瞬时转染AGS的WB鉴定 | 第39-40页 |
·各型cagA HS瞬时转染AGS对细胞形态的影响 | 第40-43页 |
·各型cagA HS瞬时转染AGS对IL-8 表达量的影响 | 第43-44页 |
4. 讨论 | 第44-45页 |
5. 小结 | 第45-47页 |
第三章 CagA EPIYA多态性与胃病的关系研究 | 第47-58页 |
1. 材料 | 第47页 |
·胃镜标本 | 第47页 |
·试剂 | 第47页 |
2. 方法 | 第47-50页 |
·人胃镜活检标本的选取、保存及信息收集 | 第47-48页 |
·人胃镜活检标本组织DNA提取 | 第48页 |
·人胃镜活检标本组织DNA PCR扩增cagA C端可变区序列 | 第48-50页 |
·相关数据统计学分析说明 | 第50页 |
3. 结果 | 第50-55页 |
·人胃镜活检标本的选取、保存及信息收集 | 第50-51页 |
·人胃镜活检标本组织DNA PCR扩增cagA C端可变区序列 | 第51-53页 |
·cagA C端可变区序列特征与胃病 | 第53-55页 |
4. 讨论 | 第55-56页 |
5. 小结 | 第56-58页 |
总结 | 第58-60页 |
参考文献 | 第60-67页 |
附录 | 第67-72页 |
个人论著 | 第72-84页 |
参考文献 | 第81-84页 |
个人简历 | 第84-85页 |
致谢 | 第85页 |