| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-28页 |
| ·南极极端环境概论 | 第12-14页 |
| ·南极低温环境 | 第12页 |
| ·南极强辐射环境 | 第12页 |
| ·UVB辐射对冰藻的伤害 | 第12-14页 |
| ·DNA损伤修复机制概述 | 第14-17页 |
| ·切除修复 | 第14-15页 |
| ·错配修复 | 第15-16页 |
| ·光复活修复 | 第16-17页 |
| ·南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L及其适应性研究 | 第17-22页 |
| ·南极冰藻生态学和应用意义 | 第17页 |
| ·南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L基本特征 | 第17-21页 |
| ·南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L的适应机制 | 第21-22页 |
| ·DNA光修复酶研究进展 | 第22-26页 |
| ·DNA光修复酶的结构 | 第22-23页 |
| ·DNA光修复酶的分类 | 第23页 |
| ·DNA光修复酶的作用机理 | 第23-25页 |
| ·光修复酶活性研究进展 | 第25-26页 |
| ·本论文拟采用的研究路线、目的和意义 | 第26-28页 |
| ·本论文拟采用的技术路线 | 第26页 |
| ·本论文研究目的和意义 | 第26-28页 |
| 第二章 南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L光修复酶基因PHR2的克隆与生物信息学分析 | 第28-44页 |
| ·材料与方法 | 第28-30页 |
| ·藻种 | 第28页 |
| ·试剂、菌种和培养基 | 第28-29页 |
| ·仪器及软件 | 第29-30页 |
| ·引物设计及合成 | 第30页 |
| ·试验方法 | 第30-37页 |
| ·南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L总RNA提取与鉴定 | 第30-31页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第31-32页 |
| ·cDNA特异片段的PCR扩增 | 第32页 |
| ·目的片段的回收 | 第32-33页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第34页 |
| ·挑取单菌落进行阳性检测 | 第34-35页 |
| ·cDNA的3’-和5’-端的RACE-PCR扩增 | 第35-37页 |
| ·生物信息学分析 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-43页 |
| ·南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L总RNA的提取鉴定 | 第37-38页 |
| ·PHR2特异片段的测序结果与序列同源性分析 | 第38-39页 |
| ·cDNA 3’-和5’-端的RACE-PCR扩增与鉴定 | 第39-40页 |
| ·PHR2 cDNA和氨基酸序列分析 | 第40-41页 |
| ·PHR2系统进化树分析 | 第41-43页 |
| ·讨论与总结 | 第43-44页 |
| 第三章 南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L PHR2表达调控 | 第44-49页 |
| ·材料与方法 | 第44-45页 |
| ·藻种 | 第44页 |
| ·试剂和仪器 | 第44页 |
| ·定量引物设计 | 第44-45页 |
| ·数据处理 | 第45页 |
| ·试验方法 | 第45-46页 |
| ·胁迫诱导 | 第45页 |
| ·南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L总RNA提取及cDNA合成 | 第45页 |
| ·实时荧光定量PCR反应体系 | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-47页 |
| ·强光对PHR2基因的转录调控 | 第46-47页 |
| ·紫外对PHR2基因的转录调控 | 第47页 |
| ·讨论与总结 | 第47-49页 |
| 第四章 南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L PHR2蛋白原核表达 | 第49-60页 |
| ·材料与方法 | 第49-50页 |
| ·菌株与质粒 | 第49页 |
| ·质粒构建相关试剂 | 第49-50页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳相关试剂 | 第50页 |
| ·试验方法 | 第50-55页 |
| ·引物设计与目的片段的扩增 | 第50-51页 |
| ·表达载体pET-28a-PHR2的构建 | 第51-53页 |
| ·表达菌株的诱导表达 | 第53-54页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第54-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-58页 |
| ·PHR2基因ORF的扩增 | 第55页 |
| ·质粒提取结果 | 第55-56页 |
| ·菌落PCR筛选阳性克隆 | 第56-57页 |
| ·PHR2蛋白的诱导表达 | 第57-58页 |
| ·讨论与总结 | 第58-60页 |
| 第五章 南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L PHR2光修复酶蛋白表达条件的优化 | 第60-77页 |
| ·材料与方法 | 第60-61页 |
| ·菌株与培养基 | 第60-61页 |
| ·仪器、试剂及软件 | 第61页 |
| ·试验方法 | 第61-65页 |
| ·牛血清蛋白(BSA)标准曲线的绘制 | 第61-62页 |
| ·单因素实验 | 第62-64页 |
| ·响应面(RSM)设计和分析 | 第64-65页 |
| ·结果与分析 | 第65-75页 |
| ·单因素实验结果 | 第65-68页 |
| ·响应面设计和分析 | 第68-75页 |
| ·分析结果验证 | 第75页 |
| ·讨论与总结 | 第75-77页 |
| 第六章 南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L PHR2光修复酶蛋白的纯化鉴定及其体内外活性检测 | 第77-88页 |
| ·材料与方法 | 第77-78页 |
| ·菌株和培养基 | 第77页 |
| ·仪器和试剂 | 第77-78页 |
| ·试验方法 | 第78-80页 |
| ·南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L PHR2蛋白的纯化 | 第78-79页 |
| ·南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L PHR2蛋白的鉴定 | 第79页 |
| ·南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L光修复酶体内活性检测 | 第79-80页 |
| ·南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L光修复酶体外活性检测 | 第80页 |
| ·结果与分析 | 第80-86页 |
| ·南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L PHR2蛋白的纯化 | 第80-82页 |
| ·南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L PHR2蛋白的鉴定 | 第82-84页 |
| ·南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L光修复酶体内活性检测 | 第84-85页 |
| ·南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L光修复酶体外活性检测 | 第85-86页 |
| ·讨论与总结 | 第86-88页 |
| 第七章 总结与后续工作计划 | 第88-90页 |
| ·总结 | 第88-89页 |
| ·后续工作计划 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-98页 |
| 硕士期间发表文章 | 第98-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
