| 摘要 | 第1-15页 |
| ABSTRACT | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-40页 |
| ·链霉菌简介 | 第17-19页 |
| ·链霉菌形态及分类学定位 | 第17-18页 |
| ·链霉菌染色体线型以及遗传不稳定性 | 第18-19页 |
| ·抗生素生物合成的分子生物学研究进展 | 第19-28页 |
| ·抗生素简介 | 第19-20页 |
| ·抗生素合成的调控 | 第20-22页 |
| ·抗生素生物合成基因簇的研究进展 | 第22-24页 |
| ·链霉菌抗生素生物合成基因的功能分析 | 第24-25页 |
| ·组合生物合成及其在聚酮合酶改造中的应用 | 第25-28页 |
| ·天然产物与组合生物学 | 第28-31页 |
| ·天然产物研究的现状 | 第28-30页 |
| ·天然产物的组合生物学研究 | 第30-31页 |
| ·链霉菌遗传操作系统 | 第31-32页 |
| ·链霉菌遗传操作系统的建立 | 第31-32页 |
| ·阿扎霉素产生菌遗传操作系统的建立和优化 | 第32页 |
| ·阿扎霉素简介 | 第32-35页 |
| ·腈水解酶超家族简介 | 第35-39页 |
| ·腈水解酶超家族的生理学意义 | 第35页 |
| ·腈水解酶超家族的分类 | 第35-36页 |
| ·腈水解酶超家族的分类依据 | 第36-38页 |
| ·腈水解酶超家族的应用 | 第38-39页 |
| ·本课题的研究目的及意义 | 第39-40页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第40-54页 |
| ·实验材料 | 第40-48页 |
| ·菌株 | 第40-41页 |
| ·质粒 | 第41-42页 |
| ·引物及其序列 | 第42-44页 |
| ·培养基和化学试剂 | 第44-46页 |
| ·表达蛋白 | 第46-47页 |
| ·化合物底物 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-54页 |
| ·链霉菌培养及菌种保藏 | 第48页 |
| ·梯度平板法对链霉菌抗生素敏感性的测定 | 第48-49页 |
| ·链霉菌-大肠杆菌属间接合转移 | 第49页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的提取(普通质粒小提试剂盒) | 第49-50页 |
| ·DNA片段的回收(DNA纯化回收试剂盒) | 第50页 |
| ·链霉菌总DNA的少量提取 | 第50-51页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第51页 |
| ·大肠杆菌转化实验 | 第51页 |
| ·链霉菌质粒DNA的大量提取 | 第51-52页 |
| ·阿扎霉素及其衍生物的快速提取 | 第52页 |
| ·阿扎霉素及其衍生物的HPLC-MS检测分析 | 第52页 |
| ·Azl13及其点突变蛋白分子量的LC-ESI-HRMS检测 | 第52页 |
| ·生物信息学分析 | 第52-53页 |
| ·Azl13芳基酰基酰胺酶活性产物的HPLC分析 | 第53页 |
| ·阿扎霉素产生菌Streptomyces sp.211726的菌种保藏号和基因azl13Genebank序列登录号 | 第53-54页 |
| 第三章 阿扎霉素产生菌Streptomyces sp.211726遗传操作系统的建立 | 第54-64页 |
| ·引言 | 第54-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-62页 |
| ·Streptomyces sp.211726培养条件的优化 | 第55-56页 |
| ·Streptomyces sp.211726抗性敏感性测试 | 第56-57页 |
| ·接合转移质粒的选择 | 第57-59页 |
| ·基于菌丝体的接合转移系统 | 第59-60页 |
| ·基于孢子的接合转移系统 | 第60页 |
| ·pYH7接合转移子的验证 | 第60-61页 |
| ·pSET152和pIB139接合转移子的验证 | 第61-62页 |
| ·小结与讨论 | 第62-64页 |
| 第四章 阿扎霉素生物合成基因簇的定位及鉴定 | 第64-76页 |
| ·引言 | 第64页 |
| ·结果与分析 | 第64-74页 |
| ·阿扎霉素F系列化合物生物合成基因簇的生物信息学分析 | 第64-70页 |
| ·阿扎霉素生物合成基因簇的确定 | 第70-74页 |
| ·小结与讨论 | 第74-76页 |
| 第五章 阿扎霉素F_(3a)生物合成基因簇边界的确定及基因功能分析 | 第76-85页 |
| ·引言 | 第76页 |
| ·结果与分析 | 第76-84页 |
| ·阿扎霉素F_(3a)生物合成基因簇左边界的分析与确定 | 第76-80页 |
| ·阿扎霉素F(3a)生物合成基因簇右边界的分析与确定 | 第80-84页 |
| ·小结与讨论 | 第84-85页 |
| 第六章 阿扎霉素F_(3a)生物合成基因簇中非PKS基因的功能研究和生物合成途径的推测 | 第85-113页 |
| ·引言 | 第85-88页 |
| ·结果与分析 | 第88-111页 |
| ·azl13(酰胺酶同源基因)的体内敲除 | 第88-91页 |
| ·Azl13(酰胺酶同源蛋白)的体外酶学催化 | 第91-93页 |
| ·azl5(酰基转移酶同源基因)的体内敲除 | 第93-97页 |
| ·azl6(TetR家族转录调控因子同源基因)体内敲除 | 第97-100页 |
| ·azl7(α/β水解酶同源基因)体内敲除 | 第100-103页 |
| ·azl10(纤维素结合蛋白同源基因)体内敲除 | 第103-107页 |
| ·azl8 （HxlR家族转录调控同源基因）体内敲除 | 第107-111页 |
| ·小结与讨论 | 第111-113页 |
| 第七章 Azl13酶学功能分析 | 第113-123页 |
| ·引言 | 第113-114页 |
| ·结果与分析 | 第114-122页 |
| ·azl13基因的克隆、蛋白表达和纯化 | 第114-115页 |
| ·Azl13的温度和pH稳定性 | 第115-117页 |
| ·Azl13的底物特异性 | 第117-120页 |
| ·Azl13的酶抑制剂 | 第120页 |
| ·Azl13活性位点的定点突变 | 第120-122页 |
| ·小结与讨论 | 第122-123页 |
| 第八章 总结与展望 | 第123-126页 |
| ·本研究工作总结 | 第123-124页 |
| ·本研究工作展望 | 第124-126页 |
| 参考文献 | 第126-132页 |
| 攻读博士期间的科研成果 | 第132页 |
| 已申请的发明专利 | 第132-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
