| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 主要符号表 | 第14-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-30页 |
| ·羧肽酶及其性质 | 第16页 |
| ·羧肽酶 | 第16页 |
| ·羧肽酶的应用 | 第16页 |
| ·羧肽酶的种类 | 第16-18页 |
| ·丝氨酸羧肽酶 | 第17页 |
| ·半胱氨酸羧肽酶 | 第17页 |
| ·金属羧肽酶 | 第17-18页 |
| ·羧肽酶Y | 第18-19页 |
| ·羧肽酶Y | 第18-19页 |
| ·羧肽酶Y特性 | 第19页 |
| ·羧肽酶Y的研究进展 | 第19-20页 |
| ·羽毛的加工 | 第20-22页 |
| ·高温高压 | 第20-21页 |
| ·微波法 | 第21页 |
| ·酸碱法 | 第21页 |
| ·酶法及微生物降解法 | 第21-22页 |
| ·PCR扩增 | 第22-23页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第23-27页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第24-25页 |
| ·毕赤酵母受体菌株 | 第25-26页 |
| ·影响外源蛋白在P.pastoris中高效表达的因素 | 第26-27页 |
| ·酶源激活的方式 | 第27-28页 |
| ·自激活 | 第27页 |
| ·蛋白酶激活 | 第27页 |
| ·依赖pH值 | 第27-28页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第28-30页 |
| 第2章 材料与方法 | 第30-44页 |
| ·材料 | 第30-34页 |
| ·质粒和菌株 | 第30-31页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| ·各种培养基 | 第31页 |
| ·仪器 | 第31-32页 |
| ·实验过程中重要溶液 | 第32-34页 |
| ·方法 | 第34-44页 |
| ·PRC1基因的克隆 | 第34-36页 |
| ·表达载体pHBM905A-proCPY的构建 | 第36-37页 |
| ·E.coliXL-DH Gold感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| ·毕赤酵母的转化及重组子的鉴定 | 第37-38页 |
| ·羧肽酶Y诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第38-39页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第39-40页 |
| ·Western blotting分析 | 第40页 |
| ·羧肽酶Y的激活及纯化 | 第40-41页 |
| ·羧肽酶Y的去N-糖基化处理 | 第41页 |
| ·羧肽酶Y酶学性质分析 | 第41-42页 |
| ·薄层层析分离氨基酸 | 第42页 |
| ·羽毛肽的制备(略) | 第42页 |
| ·羽毛肽的喷雾干燥 | 第42-43页 |
| ·羽毛肽经CPY水解 | 第43页 |
| ·统计学分析及软件 | 第43-44页 |
| 第3章 结果与分析 | 第44-55页 |
| ·表达载体pHBM905A-proCPY的构建 | 第44-45页 |
| ·毕赤酵母的转化及重组子的鉴定 | 第45页 |
| ·羧肽酶Y原诱导表达及浓度测定 | 第45-47页 |
| ·羧肽酶Y的纯化及肽酶活性测定 | 第47-50页 |
| ·羧肽酶Y的定性 | 第50-52页 |
| ·酯酶活性 | 第50页 |
| ·肽酶活性定性分析 | 第50-52页 |
| ·羽毛肽经CPY水解 | 第52-55页 |
| 第4章 讨论与展望 | 第55-58页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| ·羧肽酶Y的异源表达 | 第55页 |
| ·羧肽酶Y的激活 | 第55-56页 |
| ·羧肽酶Y水解羽毛肽 | 第56-57页 |
| ·展望 | 第57-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |