第一章 文献综述 小麦转基因及叶片衰老调控研究进展 | 第1-39页 |
1 小麦转基因研究 | 第12-30页 |
1.1 小麦转基因研究的历史 | 第12-13页 |
1.2 小麦转基因的转化体系研究 | 第13-14页 |
1.3 小麦转基因的受体系统研究 | 第14-15页 |
1.3.1 原生质体 | 第14页 |
1.3.2 胚性愈伤组织 | 第14-15页 |
1.3.3 雌蕊 | 第15页 |
1.4 小麦遗传转化的目标基因研究 | 第15-17页 |
1.4.1 报告基因 | 第15-16页 |
1.4.2 功能基因 | 第16-17页 |
1.4.3 部分或全部基因组 | 第17页 |
1.5 小麦转基因的方法 | 第17-24页 |
1.5.1 根癌农杆菌介导法 | 第18-20页 |
1.5.2 基因枪法 | 第20-21页 |
1.5.3 花粉管通道法 | 第21-23页 |
1.5.4 其它直接转化方法 | 第23-24页 |
1.6 筛选方法研究 | 第24-25页 |
1.7 小麦转基因植株的鉴定 | 第25页 |
1.8 外源基因在植物基因组中的整合 | 第25-26页 |
1.8.1 整合位点与拷贝数 | 第25-26页 |
1.8.2 外源基因的整合方式 | 第26页 |
1.9 外源基因的表达 | 第26-28页 |
1.9.1 影响外源基因表达的因素 | 第26-28页 |
1.9.2 提高外源基因表达的策略 | 第28页 |
1.10 转基因小麦的遗传行为 | 第28-29页 |
1.11 小麦转基因存在的主要问题 | 第29-30页 |
2 小麦叶片衰老及其调控研究 | 第30-37页 |
2.1 小麦叶片衰老的形态和生理指标 | 第30页 |
2.1.1 叶片衰老的形态指标 | 第30页 |
2.1.2 叶片衰老的生理指标 | 第30页 |
2.2 小麦叶片衰老过程中的生理生化变化 | 第30-31页 |
2.3 影响小麦叶片衰老的因素 | 第31-33页 |
2.3.1 外界因素 | 第31-32页 |
2.3.2 自主调节因子 | 第32-33页 |
2.4 叶片衰老的机理 | 第33页 |
2.5 叶片衰老相关基因 | 第33-34页 |
2.6 细胞分裂素在延缓叶片衰老中的作用 | 第34-35页 |
2.7 叶片衰老的调控 | 第35-37页 |
2.7.1 常规育种途径 | 第35-36页 |
2.7.2 作物栽培途径 | 第36页 |
2.7.3 基因工程途径 | 第36-37页 |
3 研究的目的和意义 | 第37-38页 |
4 研究的整体方案 | 第38页 |
5 预期目标及新见解 | 第38-39页 |
第二章 利用农杆菌浸泡种子法将叶片衰老抑制基因P-(SAG12)-IPT导入普通小麦的研究 | 第39-50页 |
1 材料与方法 | 第39-46页 |
1.1 材料 | 第39-40页 |
1.1.1 小麦品种 | 第39-40页 |
1.1.2 农杆菌菌株 | 第40页 |
1.1.3 转化载体 | 第40页 |
1.1.4 试验所用培养基 | 第40页 |
1.2 方法 | 第40-46页 |
1.2.1 小麦种子准备 | 第40页 |
1.2.2 农杆菌准备 | 第40页 |
1.2.3 农杆菌浸泡转化 | 第40页 |
1.2.4 转基因植株的分子检测 | 第40-44页 |
1.2.5 GUS基因表达的组织化学法检测 | 第44页 |
1.2.6 转基因植株的表达分析 | 第44-45页 |
1.2.7 转基因植株后代(T_1)的遗传分析 | 第45-46页 |
2 结果与分析 | 第46-49页 |
2.1 转基因植株的PCR和GUS检测 | 第46页 |
2.2 转基因植株的Southern杂交验证 | 第46-47页 |
2.3 转基因植株叶片细胞分裂素含量、叶绿素含量及衰老程度分析 | 第47-48页 |
2.4 转基因植株农艺性状分析发 | 第48页 |
2.5 转基因植株后代(T_1)分析 | 第48-49页 |
3 小结 | 第49-50页 |
第三章 利用农杆菌常规介导法将叶片衰老抑制基因PSAG12-IPT导入普通小麦的研究 | 第50-56页 |
1 材料与方法 | 第50-52页 |
1.1 实验材料 | 第50-51页 |
1.1.1 供试品种 | 第50页 |
1.1.2 农杆菌菌株 | 第50页 |
1.1.3 转化载体 | 第50页 |
1.1.4 试验所用培养基 | 第50-51页 |
1.2 方法 | 第51-52页 |
1.2.1 小麦外植体的准备 | 第51页 |
1.2.2 潮霉素(Hn)有效筛选浓度的试验 | 第51-52页 |
1.2.3 分化培养基的筛选试验 | 第52页 |
1.2.4 农杆菌的准备 | 第52页 |
1.2.5 农杆菌转化 | 第52页 |
2 结果与分析 | 第52-55页 |
2.1 胚性愈伤的获得 | 第52-53页 |
2.2 西农1376和京花1号愈伤组织对潮霉素的敏感性 | 第53-54页 |
2.3 分化培养基的筛选结果 | 第54页 |
2.4 抗性愈伤的获得 | 第54-55页 |
3 小结 | 第55-56页 |
第四章 利用花粉管通道法将叶片衰老抑制基因PSAG12-IPT导入普通小麦的研究 | 第56-65页 |
1 材料与方法 | 第56-60页 |
1.1 实验材料 | 第56-57页 |
1.1.1 供试品种 | 第56页 |
1.1.2 菌株 | 第56-57页 |
1.1.3 质粒 | 第57页 |
1.1.4 试验所用培养基 | 第57页 |
1.2 方法 | 第57-60页 |
1.2.1 质粒DNA的小量提取 | 第57-58页 |
1.2.2 质粒DNA转化大肠杆菌 | 第58页 |
1.2.3 质粒DNA的大量制备 | 第58-59页 |
1.2.4 质粒DNA的纯化 | 第59页 |
1.2.5 花粉管通道方法转化西农1376 | 第59-60页 |
1.2.6 点杂交 | 第60页 |
1.2.7 PCR,GUS,Southern杂交检测、表达及后代遗传分析 | 第60页 |
2 结果与分析 | 第60-64页 |
2.1 转基因植株的PCR和GUS检测 | 第60-61页 |
2.2 转基因植株的点杂交和Southern杂交验证 | 第61-62页 |
2.3 转基因植株的叶片细胞分裂素含量、叶绿素含量及衰老程度分析 | 第62-63页 |
2.4 转基因植株农艺性状分析 | 第63-64页 |
2.5 转基因植株后代(T_1)遗传分析 | 第64页 |
3 小结 | 第64-65页 |
第五章 卡那霉素在转基因小麦后代筛选中的应用研究 | 第65-69页 |
1 材料与方法 | 第65-66页 |
1.1 实验材料 | 第65页 |
1.1.1 供试材料 | 第65页 |
1.1.2 筛选液成分 | 第65页 |
1.2 实验方法 | 第65-66页 |
1.2.1 卡那霉素有效筛选浓度试验 | 第65页 |
1.2.2 T_1代西农1376卡那霉素抗性苗的PCR检测 | 第65-66页 |
2 结果与分析 | 第66-68页 |
2.1 西农1376和西农2611对卡那霉素的敏感性 | 第66-67页 |
2.2 T_1代西农1376卡那霉素抗性苗的PCR检测 | 第67-68页 |
3 小结 | 第68-69页 |
第六章 讨论 | 第69-73页 |
1 农杆菌浸泡种子法转化小麦的可行性 | 第69页 |
2 质粒DNA浓度对花粉管通道法转化效率的影响 | 第69-70页 |
3 农杆菌介导法中小麦植株的再生 | 第70-71页 |
4 叶片衰老抑制基因P_SAG12-IPT在小麦中的表现 | 第71-72页 |
5 卡那霉素在转基因小麦后代筛选中的应用 | 第72-73页 |
第七章 结论 | 第73-75页 |
1 农杆菌浸泡种子法获得转基因小麦 | 第73页 |
2 农杆菌常规介导法转化小麦 | 第73页 |
3 叶片衰老抑制基因P_SAG12—IPT通过花粉管途径导入小麦 | 第73-74页 |
4 卡那霉素筛选体系的建立 | 第74-75页 |
参考文献 | 第75-87页 |
作者简介 | 第87-88页 |
致谢 | 第88页 |