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TNFR1基因沉默对氧氟沙星和麻保沙星诱导的幼龄犬软骨细胞早期凋亡的影响

摘要第1-7页
Abstract第7-9页
缩略语表第9-11页
1 前言第11-21页
   ·研究背景第11-12页
   ·文献综述第12-18页
     ·软骨细胞凋亡第12-16页
       ·线粒体凋亡通路第12-14页
       ·死亡受体通路第14-15页
       ·内质网应激第15-16页
     ·基因沉默技术的应用第16-18页
       ·siRNA与miRNA的区别与联系第16-17页
       ·RNAi的特征第17页
       ·RNAi的合成及导入方法第17页
       ·RNAi技术的应用第17-18页
   ·本课题研究思路第18-19页
   ·研究目标第19页
   ·研究内容第19-21页
2 材料和方法第21-30页
   ·细胞株第21页
   ·实验用药第21页
   ·主要试剂第21-22页
   ·主要仪器第22页
   ·溶液配制第22页
   ·软骨细胞的采集第22-23页
   ·软骨细胞的鉴定第23-24页
     ·细胞爬片第23页
     ·软骨细胞H.E染色第23-24页
     ·软骨细胞阿利辛蓝和甲苯氨蓝染色第24页
     ·软骨细胞的Ⅱ型胶原免疫组织化学染色第24页
   ·MTT法检测细胞的活力第24-25页
   ·Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡率第25页
   ·RT-PCR检测TNFR通路关键基因的mRNA表达水平第25-27页
     ·细胞加药处理第25-26页
     ·总RNA的提取及质量检测第26页
     ·实时荧光定量PCR检测目的基因mRNA表达水平第26-27页
   ·Western blot检测TNF/TNFR1的磷酸化水平第27-29页
   ·TNFR1-siRNA干扰第29页
   ·统计学分析第29-30页
3 结果与分析第30-39页
   ·软骨细胞培养第30页
   ·软骨细胞的鉴定第30-31页
   ·软骨细胞活性的变化情况第31-32页
   ·软骨细胞凋亡率的变化情况第32-33页
   ·RNA质量的鉴定第33-34页
   ·氧氟沙星和麻保沙星对TNFR信号通路相关基因mRNA水平的影响第34-35页
   ·氧氟沙星和麻保沙星对TNF-α/TNFR1蛋白表达的影响第35-36页
   ·TNFR1-siRNA干扰第36-39页
4 讨论第39-44页
   ·软骨细胞培养及鉴定第39-40页
   ·药物浓度和取样检测时间点的选择第40-42页
   ·QNs诱导TNFR信号通路的激活第42-44页
5 全文总结第44-45页
参考文献第45-54页
附录第54-57页
致谢第57页

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