| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 1. 文献综述-昆虫生长发育与几丁质合酶 | 第15-33页 |
| ·昆虫生长发育 | 第15-18页 |
| ·昆虫生长发育的形式 | 第15-16页 |
| ·昆虫生长发育的激素调控 | 第16-17页 |
| ·昆虫生长发育的表皮与围食膜结构 | 第17-18页 |
| ·几丁质 | 第18-21页 |
| ·几丁质的结构 | 第18-20页 |
| ·几丁质的合成 | 第20-21页 |
| ·昆虫几丁质合酶 | 第21-30页 |
| ·昆虫几丁质合酶的酶学性质 | 第21-22页 |
| ·昆虫几丁质合酶的基因序列及分类 | 第22-24页 |
| ·昆虫几丁质合酶的氨基酸序列及结构 | 第24-26页 |
| ·昆虫几丁质合酶的生理功能 | 第26-27页 |
| ·昆虫几丁质合酶的基因组序列及可变剪切 | 第27-28页 |
| ·昆虫几丁质合酶的基因表达调控 | 第28-29页 |
| ·昆虫几丁质合酶翻译后水平的调控 | 第29-30页 |
| ·本论文的选题依据和研究内容 | 第30-33页 |
| ·选题依据 | 第30-31页 |
| ·研究内容 | 第31-33页 |
| 2 亚洲玉米螟A类几丁质合酶(OfCHSA)基因的序列分析 | 第33-52页 |
| ·引言 | 第33页 |
| ·A类几丁质合酶基因mRNA获取 | 第33-41页 |
| ·RNA提取及cDNA合成 | 第33-34页 |
| ·基因获取策略及引物设计 | 第34页 |
| ·PCR反应 | 第34-35页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳及回收 | 第35页 |
| ·目的片段与T载体连接及转化 | 第35-36页 |
| ·PCR检菌及质粒提取 | 第36页 |
| ·3'RACE | 第36-37页 |
| ·5'RACE | 第37-38页 |
| ·序列测定 | 第38页 |
| ·序列分析 | 第38-39页 |
| ·gDNA提取 | 第39页 |
| ·基因组DNA获取策略及引物设计 | 第39-40页 |
| ·两翼未知序列的获得 | 第40-41页 |
| ·序列分析 | 第41页 |
| ·实验结果 | 第41-46页 |
| ·A类几丁质合酶的序列分析 | 第41-42页 |
| ·几丁质合酶的保守氨基酸序列 | 第42-43页 |
| ·A类几丁质合酶的二级结构特征及蛋白质修饰位点 | 第43-44页 |
| ·A类几丁质合酶的gDNA结构 | 第44-46页 |
| ·分析讨论 | 第46-50页 |
| ·A类几丁质合酶cDNA及蛋白序列 | 第46-49页 |
| ·A类几丁质合酶的基因组序列及可变剪切 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-52页 |
| 3 A类几丁质合酶基因表达模式 | 第52-73页 |
| ·引言 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-59页 |
| ·A类几丁质合酶可变首个外显子的验证 | 第52-53页 |
| ·A类几丁质合酶可变首个外显子启动子分析 | 第53页 |
| ·亚洲玉米螟人工饲养 | 第53-55页 |
| ·总RNA提取及cDNA合成 | 第55页 |
| ·Real-Time PCR反应及标准曲线的建立及定量方法 | 第55-57页 |
| ·A类几丁质合酶在不同玉米螟生长时期的表达 | 第57页 |
| ·A类几丁质合酶在不同玉米螟组织中的表达 | 第57-58页 |
| ·A类几丁质合酶多种转录产物在玉米螟不同生长时期的表达 | 第58页 |
| ·A类几丁质合酶多种转录产物的组织和性别表达特异性 | 第58-59页 |
| ·实验结果 | 第59-68页 |
| ·A类几丁质合酶的可变剪切外显子2 | 第59-61页 |
| ·A类几丁质合酶的可变剪切外显子19 | 第61-62页 |
| ·A类几丁质合酶的启动子结构 | 第62-63页 |
| ·A类几丁质合酶的发育特异性和组织特异性表达 | 第63-64页 |
| ·A类几丁质合酶可变剪切产物在不同发育时期的表达 | 第64-67页 |
| ·A类几丁质合酶可变剪切产物的组织表达特异性 | 第67页 |
| ·A类几丁质合酶可变剪切产物的性别表达特异性 | 第67-68页 |
| ·结果分析与讨论 | 第68-71页 |
| ·A类几丁质合酶的可变剪切 | 第68-69页 |
| ·A类几丁质合酶的启动子分析 | 第69页 |
| ·A类几丁质合酶的表达特异性 | 第69-70页 |
| ·A类几丁质合酶可变剪切外显子的表达 | 第70-71页 |
| ·小结 | 第71-73页 |
| 4 A类几丁质合酶基因的多种转录产物及其功能分析 | 第73-88页 |
| ·引言 | 第73页 |
| ·实验材料与方法 | 第73-77页 |
| ·A类几丁质合酶可变剪切产生异构体的检测 | 第73-74页 |
| ·20E处理亚洲玉米螟幼虫 | 第74页 |
| ·20E处理后表型的观察及基因表达水平检测 | 第74-75页 |
| ·用于dsRNA合成的模板DNA的制备 | 第75页 |
| ·双链RNA的合成 | 第75-76页 |
| ·双链RNA的导入 | 第76页 |
| ·RNA干扰水平检测及表型观察 | 第76-77页 |
| ·实验结果 | 第77-84页 |
| ·A类几丁质合酶可变剪切产生的异构体 | 第77-79页 |
| ·20E处理后玉米螟的表型及基因表达水平变化 | 第79-80页 |
| ·dsRNA的合成 | 第80页 |
| ·dsRNA对A类几丁质合酶基因表达的干扰作用 | 第80-81页 |
| ·A类几丁质合酶RNA干扰对3龄玉米螟幼虫产生的影响 | 第81-82页 |
| ·A类几丁质合酶RNA干扰对5龄玉米螟幼虫产生的影响 | 第82-84页 |
| ·结果分析与讨论 | 第84-86页 |
| ·A类几丁质合酶的生理功能 | 第84页 |
| ·A类几丁质合酶能够响应20E的诱导 | 第84-85页 |
| ·A类几丁质合酶可变剪切外显子存在四种不同的组合方式 | 第85页 |
| ·含有外显子2a的转录产物作为OfCHSA的主要转录产物发挥功能 | 第85-86页 |
| ·含有外显子2b的转录产物对于20E的响应比含有外显子2a的快 | 第86页 |
| ·小结 | 第86-88页 |
| 5 亚洲玉米螟B类几丁质合酶(OfCHSB)的基因序列及表达模式和生理功能分析 | 第88-102页 |
| ·引言 | 第88页 |
| ·实验方法 | 第88-93页 |
| ·B类几丁质合酶的cDNA获取 | 第88页 |
| ·B类几丁质合酶的gDNA获取 | 第88-90页 |
| ·B类几丁质合酶调控序列预测 | 第90页 |
| ·RNA提取及Real-Time PCR反应 | 第90-92页 |
| ·B类几丁质合酶在不同玉米螟生长时期的表达 | 第92页 |
| ·B类几丁质合酶在不同玉米螟组织中的表达 | 第92-93页 |
| ·实验结果 | 第93-98页 |
| ·B类几丁质合酶的cDNA序列 | 第93页 |
| ·B类几丁质合酶的二级结构特征及蛋白质修饰位点 | 第93-94页 |
| ·B类几丁质合酶的gDNA结构 | 第94-95页 |
| ·B类几丁质合酶的上游调控元件 | 第95-96页 |
| ·B类几丁质合酶在不同发育过程中的表达 | 第96页 |
| ·B类几丁质合酶在不同玉米螟组织中的表达 | 第96-98页 |
| ·结果讨论 | 第98-101页 |
| ·B类几丁质合酶的cDNA及蛋白序列 | 第98-99页 |
| ·B类几丁质合酶的基因组序列 | 第99-100页 |
| ·B类几丁质合酶的启动子分析 | 第100页 |
| ·B类几丁质合酶的基因表达特异性 | 第100-101页 |
| ·B类几丁质合酶的RNA干扰 | 第101页 |
| ·小结 | 第101-102页 |
| 6 B类几丁质合酶的重组表达及重组蛋白的细胞定位 | 第102-116页 |
| ·引言 | 第102页 |
| ·实验方法 | 第102-107页 |
| ·几丁质合酶酿酒酵母表达载体构建 | 第102页 |
| ·酵母细胞的培养及转化 | 第102-104页 |
| ·昆虫几丁质合酶在酵母细胞中的体内活性 | 第104-105页 |
| ·采用同位素标记的底物检测昆虫几丁质合酶活性 | 第105页 |
| ·SDS-PAGE及Western Blot | 第105-106页 |
| ·酵母中几丁质合酶重组蛋白的定位 | 第106页 |
| ·几丁质合酶昆虫表达载体构建 | 第106-107页 |
| ·昆虫细胞的培养及转染 | 第107页 |
| ·昆虫细胞中重组蛋白的免疫荧光 | 第107页 |
| ·实验结果 | 第107-113页 |
| ·B类几丁质合酶在酵母细胞中的表达 | 第107-109页 |
| ·B类几丁质合酶在酵母细胞中的体内活性 | 第109页 |
| ·转化B类几丁质合酶菌株对放射性同位素底物的体外活性 | 第109-110页 |
| ·B类几丁质合酶在酵母细胞中的定位 | 第110-111页 |
| ·B类几丁质合酶在昆虫细胞中的表达 | 第111-112页 |
| ·重组表达的B类几丁质合酶在昆虫细胞中的定位 | 第112-113页 |
| ·分析与讨论 | 第113-115页 |
| ·B类几丁质合酶在酵母细胞中的表达 | 第113-114页 |
| ·B类几丁质合酶在昆虫细胞中的表达 | 第114-115页 |
| ·小结 | 第115-116页 |
| 结论 | 第116-118页 |
| 展望 | 第118-119页 |
| 创新点摘要 | 第119-120页 |
| 参考文献 | 第120-127页 |
| 附件A：A类几丁质合酶cDNA及其编码的氨基酸 | 第127-129页 |
| 附件B：B类几丁质合酶cDNA及其编码的氨基酸 | 第129-131页 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文情况 | 第131-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
| 作者简介 | 第133-134页 |
