| 符号说明 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1. 引言 | 第13-32页 |
| ·禽网状内皮组织增生症的研究现状 | 第14-19页 |
| ·REV的分子病原学特性 | 第14-15页 |
| ·REV的病理生物学和流行病学 | 第15-19页 |
| ·水平传播 | 第15-16页 |
| ·垂直传播 | 第16页 |
| ·临床症状及病理变化 | 第16-17页 |
| ·REV的诊断 | 第17-19页 |
| ·REV的防治 | 第19页 |
| ·禽网状内皮组织增生症病毒引起的免疫抑制 | 第19-20页 |
| ·禽网状内皮组织增生症的检测方法 | 第20-21页 |
| ·病毒的分离与鉴定 | 第20页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第20页 |
| ·荧光抗体试验 | 第20页 |
| ·斑点杂交试验 | 第20页 |
| ·免疫过氧化物酶蚀斑测定法 | 第20-21页 |
| ·酶联免疫吸附实验(ELISA) | 第21页 |
| ·ELISA检测技术及影响因素 | 第21-30页 |
| ·酶联免疫吸附实验(ELISA)的原理 | 第21页 |
| ·酶联免疫吸附实验(ELISA)的类型 | 第21-24页 |
| ·双抗体夹心法测抗原 | 第22页 |
| ·双抗原夹心法测抗体 | 第22页 |
| ·间接法测抗体 | 第22-23页 |
| ·竞争法测抗体 | 第23页 |
| ·竞争法测抗原 | 第23页 |
| ·捕获包被法测抗体 | 第23-24页 |
| ·ABS-ELISA法 | 第24页 |
| ·酶联免疫吸附实验(ELISA)的影响因素 | 第24-30页 |
| ·方法学的影响 | 第24页 |
| ·试剂因素 | 第24-25页 |
| ·样本因素 | 第25-26页 |
| ·操作因素对ELISA结果的影响 | 第26-27页 |
| ·灰区的设置 | 第27-28页 |
| ·标本复查 | 第28页 |
| ·结果判断和报告 | 第28-29页 |
| ·原始记录 | 第29页 |
| ·质量控制 | 第29-30页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第30-32页 |
| 2. 材料和方法 | 第32-40页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·实验细胞 | 第32页 |
| ·实验用病毒、菌种和载体质粒 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32-33页 |
| ·实验地点 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-40页 |
| ·PET-28A-ENV重组质粒的构建 | 第33-34页 |
| ·前病毒DNA的制备 | 第33页 |
| ·引物的设计与合成 | 第33页 |
| ·目的基因的获得 | 第33-34页 |
| ·PET28A-ENV重组质粒的构建 | 第34页 |
| ·连接产物的转化 | 第34页 |
| ·REV HIS-ENV蛋白的表达与纯化 | 第34-37页 |
| ·REV-ENV基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·表达条件的优化 | 第35页 |
| ·包涵体的提取 | 第35-36页 |
| ·蛋白复性(尿素洗涤) | 第36页 |
| ·WESTERN-BLOT检测纯化后的蛋白 | 第36-37页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第37-39页 |
| ·间接ELISA方法检测抗体的常规步骤 | 第37页 |
| ·间接ELISA条件的优化 | 第37-39页 |
| ·间接ELISA方法的特异性 | 第39页 |
| ·间接ELISA方法的重复性检测 | 第39页 |
| ·本ELISA检测方法与现有商品化试剂盒的比较 | 第39页 |
| ·本间接ELISA检测方法的临床应用 | 第39-40页 |
| 3. 结果与分析 | 第40-58页 |
| ·重组HIS-ENV蛋白的表达与纯化 | 第40-42页 |
| ·菌体的活化 | 第40页 |
| ·ENV基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第40-41页 |
| ·REV-ENV蛋白的纯化效果 | 第41页 |
| ·REV HIS-ENV蛋白特异性的WESTERN BLOT分析 | 第41-42页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第42-50页 |
| ·抗原抗体最佳稀释倍数 | 第42-43页 |
| ·最佳包被液的选择 | 第43页 |
| ·最佳封闭液浓度的选择 | 第43-44页 |
| ·最佳封闭时间的选择 | 第44-45页 |
| ·抗血清最佳作用时间的选择 | 第45-46页 |
| ·二抗最佳稀释度的选择 | 第46-47页 |
| ·二抗作用时间的选择 | 第47页 |
| ·最佳显色时间的选择 | 第47-48页 |
| ·临界值的计算 | 第48-49页 |
| ·特异性检测 | 第49页 |
| ·重复性试验 | 第49-50页 |
| ·板内重复 | 第49页 |
| ·板间重复 | 第49-50页 |
| ·比较试验 | 第50-54页 |
| ·REV-ENV ELISA试剂盒的临床应用 | 第54-58页 |
| 4. 讨论 | 第58-62页 |
| ·原核表达条件的优化 | 第58-59页 |
| ·包涵体的纯化与复性 | 第59-60页 |
| ·包涵体的提取 | 第59页 |
| ·包涵体的纯化 | 第59-60页 |
| ·包涵体的复性 | 第60页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立及应用 | 第60-62页 |
| 5. 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70页 |