| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 1.前言 | 第11-20页 |
| ·细小病毒科简介 | 第11-12页 |
| ·浓核病毒亚科简介 | 第12-13页 |
| ·家蚕浓核病毒BmDNV-1简介 | 第13-16页 |
| ·家蚕浓核病毒BmDNV-1的发现及初步研究 | 第13-14页 |
| ·家蚕浓核病毒BmDNV-1的三维结构结构研究 | 第14-15页 |
| ·家蚕浓核病毒BmDNV-1vp1独特区的磷脂酶A2活性 | 第15-16页 |
| ·浓核病毒转录研究进展 | 第16-17页 |
| ·表达系统介绍 | 第17-20页 |
| ·pET原核表达系统简介(pET System Manual第10版) | 第17页 |
| ·pMAL~(TM)原核表达系统简介 | 第17-18页 |
| ·Bac-to-Bac杆状病毒表达系统简介 | 第18页 |
| ·pGL3 Luciferase Reporter系统简介 | 第18-19页 |
| ·InsectSel~(TM) Glow System的简介 | 第19-20页 |
| 2.家蚕浓核病毒(BmDNV-1)结构蛋白VP1独特区基因的克隆、原核表达及纯化 | 第20-31页 |
| ·主要实验材料 | 第20-21页 |
| ·菌株和质粒 | 第20页 |
| ·药品和试剂 | 第20-21页 |
| ·常用溶液及配制 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-25页 |
| ·氯化锂法提取质粒DNA | 第21页 |
| ·目的基因vp1u的PCR扩增 | 第21页 |
| ·DNA片段的回收与纯化 | 第21-22页 |
| ·原核表达重组质粒的构建 | 第22-24页 |
| ·VP1u蛋白的原核表达 | 第24页 |
| ·融和蛋白的SDS-PAGE和Western Blotting检测 | 第24页 |
| ·优化诱导表达融合蛋白的条件 | 第24页 |
| ·融合蛋白的分离纯化 | 第24-25页 |
| ·结果与分析 | 第25-29页 |
| ·目的基因vplu的PCR扩增 | 第25页 |
| ·重组质粒pET-28a-vp1u和pMal-c2X-vp1u的构建和鉴定 | 第25-27页 |
| ·融合蛋白的诱导表达及检测 | 第27-28页 |
| ·融合蛋白的纯化及检测 | 第28-29页 |
| ·小结与讨论 | 第29-31页 |
| ·关于克隆的构建 | 第29页 |
| ·关于蛋白的表达与纯化 | 第29-31页 |
| 3.家蚕浓核病毒(BmDNV-1)结构蛋白VP1在BAC-TO-BAC杆状病毒系统中的表达 | 第31-41页 |
| ·主要实验材料 | 第31页 |
| ·菌株和质粒 | 第31页 |
| ·药品和试剂 | 第31页 |
| ·常用溶液及配制 | 第31-32页 |
| ·引物序列 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-35页 |
| ·目的基因vp1的PCR扩增及纯化 | 第32页 |
| ·真核重组表达载体pFastBacHTA-vp1的构建 | 第32-33页 |
| ·重组Bacmid-vp1的构建与鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组杆状病毒的制备 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-39页 |
| ·目的基因vp1的PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·重组质粒pFastBacHTA-vp1的构建和鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组Bacmid-vp1的构建与鉴定 | 第37页 |
| ·重组杆状病毒的制备 | 第37-38页 |
| ·Western Blot检测VP1和VPl-u蛋白的表达 | 第38-39页 |
| ·小结与讨论 | 第39-41页 |
| 4.家蚕浓核病毒(BmDNV-1)结构基因VP启动子活性的研究 | 第41-49页 |
| ·主要实验材料 | 第41页 |
| ·菌株和质粒 | 第41页 |
| ·药品和试剂 | 第41页 |
| ·常用溶液及配制 | 第41页 |
| ·引物序列 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-43页 |
| ·结构基因启动子VP-promoter及非结构基因NS1的PCR扩增及纯化 | 第42-43页 |
| ·重组质粒pGL3-VP-promoter-luc~+、pIZT/V5-His-NS1的构建 | 第43页 |
| ·细胞转染 | 第43页 |
| ·荧光素酶活性的测定 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-47页 |
| ·目的基因VP-promoter与NS1的PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·重组质粒pGL3-VP-promoter-luc~+、pIZT/V5-His-NS1的构建和鉴定 | 第44-45页 |
| ·VP-promoter、NS-promoter活性的测定 | 第45-46页 |
| ·pIZT/V5-His-NS1在几类昆虫细胞系中的转染效率测定 | 第46页 |
| ·启动子活性调控实验 | 第46-47页 |
| ·小结与讨论 | 第47-49页 |
| 5. 全文总结与展望 | 第49-50页 |
| ·全文总结 | 第49页 |
| ·展望 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 附录 | 第55-56页 |
| 在校期间发表的论文 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
