| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 英文缩略语表 | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 第一部分 GP系列质粒的构建 | 第15-40页 |
| 1 实验材料 | 第15-25页 |
| ·质粒 | 第15-20页 |
| ·菌株 | 第20-21页 |
| ·细胞株 | 第21页 |
| ·工具酶、酶切缓冲液 | 第21页 |
| ·主要化学试剂 | 第21页 |
| ·细胞培养用耗材 | 第21页 |
| ·试剂盒 | 第21页 |
| ·主要仪器及设备 | 第21-22页 |
| ·主要溶液配方 | 第22-24页 |
| ·主要抗体 | 第24页 |
| ·PCR引物 | 第24-25页 |
| 2 实验方法 | 第25-31页 |
| ·质粒构建 | 第25-29页 |
| ·细胞相关实验 | 第29-31页 |
| 3 实验结果 | 第31-39页 |
| ·构建pEAK13CD5L Mucin TEVhFc质粒 | 第31-33页 |
| ·构建pEAK13CD5L GP△TM TEVhFc质粒 | 第33-35页 |
| ·构建pEAK13CD5L GP△Mucin TEVhFc质粒 | 第35-37页 |
| ·构建pEAK13CD5L GP△Mucin△TM TEVhFc质粒 | 第37-39页 |
| ·质粒大量提取 | 第39页 |
| 4 结论 | 第39-40页 |
| 第二部分 Mucin-Fc及GP△TM-Fc稳定表达细胞株的构建 | 第40-44页 |
| 1 实验材料 | 第40页 |
| 2 实验方法 | 第40-41页 |
| ·DNA的纯化回收 | 第40页 |
| ·细胞冻存 | 第40页 |
| ·细胞复苏 | 第40-41页 |
| ·稳定表达细胞株的构建 | 第41页 |
| 3 实验结果 | 第41-43页 |
| ·Mucin-Fc稳定表达细胞株的构建 | 第41-42页 |
| ·GP△TM-Fc稳定表达细胞株的构建 | 第42-43页 |
| 4 结论 | 第43-44页 |
| 第三部分 GP_1-Fc、Mucin-Fc及Fc蛋白的表达及纯化 | 第44-49页 |
| 1 实验材料 | 第44页 |
| ·试剂与耗材 | 第44页 |
| ·主要仪器与设备 | 第44页 |
| 2 实验方法 | 第44-45页 |
| ·蛋白纯化 | 第44-45页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第45页 |
| 3 实验结果 | 第45-48页 |
| ·GP_1-Fc蛋白表达及纯化 | 第45-46页 |
| ·Mucin-Fc蛋白表达及纯化 | 第46页 |
| ·Fc蛋白表达及纯化 | 第46-47页 |
| ·纯化后蛋白的浓度测定 | 第47-48页 |
| 4 结论 | 第48-49页 |
| 第四部分 GP_1-Fc融合蛋白多聚体研究 | 第49-51页 |
| 1 实验材料 | 第49页 |
| 2 实验方法 | 第49-50页 |
| ·线性梯度native-PAGE | 第49-50页 |
| 3 实验结果 | 第50页 |
| ·线性梯度 native-PAGE | 第50页 |
| 4 结论 | 第50-51页 |
| 第五部分 GP细胞毒性相关研究 | 第51-55页 |
| 1 实验材料 | 第51页 |
| ·试剂与耗材 | 第51页 |
| ·主要仪器与设备 | 第51页 |
| 2 实验方法 | 第51-52页 |
| ·MTS检测细胞活力 | 第51页 |
| ·台盼蓝染色法检测细胞死亡 | 第51-52页 |
| 3 实验结果 | 第52-54页 |
| ·GP转染后细胞漂浮的情况 | 第52-53页 |
| ·MTS检测细胞活力的结果 | 第53-54页 |
| ·台盼蓝染色法检测漂浮细胞的死亡率 | 第54页 |
| 4 结论 | 第54-55页 |
| 讨论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-60页 |
| 综述 | 第60-72页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
