| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 综述 | 第15-29页 |
| 1 微生物基因组学 | 第15-17页 |
| ·微生物基因组学的研究进展 | 第15-16页 |
| ·微生物基因组学的主要内容 | 第16-17页 |
| 2 腊状芽胞杆菌群细菌基因组研究进展 | 第17-20页 |
| 3 Bt研究进展 | 第20-26页 |
| ·Bt的生物学特性 | 第20页 |
| ·杀虫晶体蛋白基因的分类 | 第20-21页 |
| ·杀虫晶体蛋白的结构和杀虫机理 | 第21-22页 |
| ·Bt中其它杀虫蛋白的研究 | 第22-24页 |
| ·营养期杀虫蛋白 | 第22页 |
| ·苏云金素 | 第22-23页 |
| ·S-layer蛋白 | 第23页 |
| ·双效菌素 | 第23-24页 |
| ·肠毒素 | 第24页 |
| ·抗癌蛋白 | 第24页 |
| ·蛋白酶类杀虫因子 | 第24页 |
| ·Bt内生质粒的特性 | 第24-25页 |
| ·Bt菌株及其杀虫晶体蛋白的应用 | 第25-26页 |
| ·Bt工程菌的构建 | 第25页 |
| ·杀虫晶体蛋白基因在植物抗虫基因工程中的应用 | 第25-26页 |
| 4 Bt MC28的特性 | 第26-27页 |
| 5 本课题的立题依据和意义 | 第27-29页 |
| 第二章 Bt MC28全基因组组装及分析 | 第29-78页 |
| 1 材料与方法 | 第29-32页 |
| ·材料与试剂 | 第29页 |
| ·菌株 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·研究方法 | 第29-32页 |
| ·Bt MC28总DNA提取 | 第29-30页 |
| ·Bt MC28基因组测序和组装 | 第30页 |
| ·Bt MC28基因组完成图组装 | 第30-31页 |
| ·完成图组装结果检验 | 第31页 |
| ·基因组和内生质粒的开放阅读框预测及注释 | 第31页 |
| ·Bt MC28基因组共线性分析 | 第31-32页 |
| ·Bt MC28基因组进化分析 | 第32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-76页 |
| ·Bt MC28基因组测序结果 | 第32页 |
| ·Bt MC28基因组基本特性 | 第32-35页 |
| ·Bt MC28染色体上毒力因子的预测和功能分析 | 第35-38页 |
| ·Bt MC28基因组共线性分析 | 第38页 |
| ·Bt MC28的系统进化分析 | 第38-44页 |
| ·Bt MC28内生质粒分析 | 第44-76页 |
| ·质粒pMC429 | 第45-53页 |
| ·质粒pMC319 | 第53-61页 |
| ·质粒pMC189 | 第61-66页 |
| ·质粒pMC183 | 第66-70页 |
| ·质粒pMC95 | 第70-73页 |
| ·质粒pMC54 | 第73-75页 |
| ·质粒pMC8 | 第75-76页 |
| 3 讨论 | 第76-78页 |
| 第三章 Bt MC28中cry68Aa1、cry70Ba1和cyt1Da1基因原核表达研究 | 第78-95页 |
| 1 材料与方法 | 第78-84页 |
| ·材料与仪器 | 第78-80页 |
| ·菌株与质粒 | 第78页 |
| ·培养基 | 第78页 |
| ·主要试剂 | 第78-80页 |
| ·仪器设备 | 第80页 |
| ·研究方法 | 第80-84页 |
| ·分子生物学操作 | 第80-82页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第82页 |
| ·E coli质粒DNA提取 | 第82页 |
| ·Bt MC28中杀虫晶体蛋白基因的克隆 | 第82-83页 |
| ·序列分析 | 第83页 |
| ·表达载体构建 | 第83-84页 |
| ·基因表达及SDS-PAGE电泳检测 | 第84页 |
| ·生物测定 | 第84页 |
| 2 结果与分析 | 第84-93页 |
| ·新型杀虫基因全长克隆及序列分析 | 第84-85页 |
| ·Cry68Aa1、Cry70Ba1和Cyt1Da1蛋白氨基酸组成及序列分析 | 第85-90页 |
| ·Cry68Aa1蛋白氨基酸组成及分析 | 第85-86页 |
| ·Cry70Ba1蛋白氨基酸组成及分析 | 第86-87页 |
| ·Cyt1Da1蛋白氨基酸组成及分析 | 第87-90页 |
| ·杀虫基因表达载体构建 | 第90页 |
| ·杀虫基因在大肠杆菌中的表达和SDS-PAGE检测 | 第90-93页 |
| ·表达蛋白的生物活性测定 | 第93页 |
| 3 讨论 | 第93-95页 |
| 第四章 cry69Aa1基因在Bt无晶体突变株HD73~-中的表达 | 第95-106页 |
| 1 材料与方法 | 第95-98页 |
| ·材料与仪器 | 第95-96页 |
| ·菌株与质粒 | 第95页 |
| ·培养基 | 第95-96页 |
| ·主要试剂 | 第96页 |
| ·仪器设备 | 第96页 |
| ·研究方法 | 第96-98页 |
| ·分子生物学操作 | 第96页 |
| ·Bt MC28中杀虫晶体蛋白基因的克隆 | 第96页 |
| ·序列分析 | 第96页 |
| ·表达载体构建 | 第96-97页 |
| ·Bt电击转化 | 第97-98页 |
| ·基因表达及SDS-PAGE电泳检测 | 第98页 |
| ·显微观察 | 第98页 |
| ·生物活性测定 | 第98页 |
| 2 结果与分析 | 第98-104页 |
| ·新型杀虫基因全长克隆 | 第98-101页 |
| ·Cry69Aa1蛋白氨基酸序列及分析 | 第101-103页 |
| ·杀虫基因的穿梭表达载体构建 | 第103页 |
| ·重组质粒在Bt无晶体突变株HD73~-中的表达 | 第103页 |
| ·杀虫晶体蛋白的扫描电镜观察 | 第103-104页 |
| ·Bt转化菌株的生物活性测定 | 第104页 |
| 3 讨论 | 第104-106页 |
| 第五章 cry54Ab1操纵子在Bt无晶体突变株HD73~-中的表达 | 第106-120页 |
| 1 材料与方法 | 第106-110页 |
| ·材料与仪器 | 第106-107页 |
| ·菌株与质粒 | 第106-107页 |
| ·培养基 | 第107页 |
| ·主要试剂 | 第107页 |
| ·仪器设备 | 第107页 |
| ·研究方法 | 第107-110页 |
| ·分子生物学操作 | 第107页 |
| ·Bt MC28中杀虫晶体蛋白基因的克隆 | 第107页 |
| ·序列分析 | 第107-108页 |
| ·表达载体构建 | 第108页 |
| ·Bt电击转化 | 第108-109页 |
| ·基因表达及SDS-PAGE电泳检测 | 第109页 |
| ·显微观察 | 第109-110页 |
| ·生物活性测定 | 第110页 |
| 2 结果与分析 | 第110-118页 |
| ·新型杀虫基因全长克隆 | 第110页 |
| ·Cry54Ab1和Orf2蛋白氨基酸序列及分析 | 第110-112页 |
| ·Cry54Ab1蛋白氨基酸序列 | 第110-111页 |
| ·Orf2蛋白氨基酸序列 | 第111-112页 |
| ·杀虫基因的穿梭表达载体构建 | 第112-113页 |
| ·重组质粒在Bt无晶体突变株HD73~-中的表达 | 第113页 |
| ·杀虫晶体蛋白的扫描电镜观察 | 第113-114页 |
| ·Bt转化菌株的生物活性测定 | 第114-118页 |
| 3 讨论 | 第118-120页 |
| 总结及后期实验展望 | 第120-121页 |
| 参考文献 | 第121-139页 |
| 致谢 | 第139-140页 |
| 在读期间发表科研论文情况 | 第140页 |
| 专利申请情况 | 第140-141页 |
| 正式命名的新型杀虫晶体蛋白基因 | 第141页 |
