绿针假单胞菌GP72中氧化应激调控因子OxyR的研究
| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 背景介绍 | 第13-23页 |
| ·植物根际促生细菌 | 第13-15页 |
| ·假单胞菌的生物功能 | 第15-17页 |
| ·吩嗪抗生素的作用机理 | 第17-18页 |
| ·吩嗪与氧化应激的关系 | 第18-21页 |
| ·OxyR 的研究进展 | 第21-22页 |
| ·本研究的目的、意义和内容 | 第22-23页 |
| 第二章 oxyR基因的克隆 | 第23-33页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·菌株、质粒与引物 | 第23页 |
| ·酶类及DNA Marker | 第23-24页 |
| ·主要培养基 | 第24页 |
| ·试验试剂 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-29页 |
| ·GP72 基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·聚合酶链式（PCR）反应 | 第25-26页 |
| ·电泳定性检验DNA | 第26页 |
| ·产物的回收纯化 | 第26-27页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·PCR产物连接克隆载体 | 第28页 |
| ·感受态细胞转化 | 第28页 |
| ·质粒提取 | 第28-29页 |
| ·测序 | 第29页 |
| ·实验结果 | 第29-31页 |
| ·oxyR基因的克隆 | 第29-30页 |
| ·OxyR调控子氨基酸序列比对 | 第30-31页 |
| ·讨论与分析 | 第31-33页 |
| 第三章 oxyR基因的突变、回补与过表达 | 第33-41页 |
| ·实验材料 | 第33-34页 |
| ·菌株、质粒与引物 | 第33-34页 |
| ·酶类及DNA Marker | 第34页 |
| ·主要培养基 | 第34页 |
| ·试验试剂 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-36页 |
| ·PCR扩增基因 | 第34-35页 |
| ·酶切，连接 | 第35-36页 |
| ·双亲杂交 | 第36页 |
| ·实验结果 | 第36-40页 |
| ·体外突变质粒pEXoxyRaacC1 的获得 | 第36-38页 |
| ·双亲杂交获得oxyR基因突变株 | 第38-39页 |
| ·体外过表达回补质粒pMEoxyR的获得 | 第39-40页 |
| ·获得oxyR基因回补菌株与表达菌株 | 第40页 |
| ·讨论与分析 | 第40-41页 |
| 第四章 突变株的生长、表型改变与产物变化 | 第41-51页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·实验菌株 | 第41页 |
| ·主要培养基 | 第41-42页 |
| ·实验试剂 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-44页 |
| ·菌体生长曲线测定 | 第42页 |
| ·菌株的发酵培养条件 | 第42-43页 |
| ·活性物质提取和测定方法 | 第43页 |
| ·菌株运动性实验 | 第43页 |
| ·菌株形态变化实验 | 第43-44页 |
| ·实验结果 | 第44-49页 |
| ·oxyR基因突变对于GP72 生长的影响 | 第44-45页 |
| ·oxyR基因突变对于GP72 吩嗪产量的影响 | 第45-46页 |
| ·oxyR基因突变对于GP72 存活能力的影响 | 第46-48页 |
| ·oxyR基因突变对于GP72 运动性的影响 | 第48页 |
| ·oxyR基因突变对于GP72 菌落形态的影响 | 第48-49页 |
| ·讨论与分析 | 第49-51页 |
| 第五章 突变株对常见氧化剂的反应 | 第51-62页 |
| ·实验材料 | 第51-52页 |
| ·实验菌株 | 第51页 |
| ·主要培养基 | 第51页 |
| ·实验试剂 | 第51-52页 |
| ·实验方法 | 第52-53页 |
| ·菌体生长曲线测定 | 第52页 |
| ·氧化敏感性试验 | 第52页 |
| ·生物膜实验 | 第52-53页 |
| ·实验结果 | 第53-59页 |
| ·固体平板上的氧化敏感性 | 第53-55页 |
| ·液体培养基中对氧化剂的抗性 | 第55-57页 |
| ·氧化应激下的生物膜变化 | 第57-59页 |
| ·讨论与分析 | 第59-62页 |
| 第六章 OxyR对相关基因调控的研究 | 第62-70页 |
| ·实验材料 | 第62-63页 |
| ·菌株与引物 | 第62-63页 |
| ·酶类及DNA Marker | 第63页 |
| ·主要培养基 | 第63页 |
| ·实验试剂 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63-66页 |
| ·提取总RNA | 第63-64页 |
| ·反转录 | 第64-65页 |
| ·测定oxyR基因表达的转录物 | 第65-66页 |
| ·实验结果 | 第66-68页 |
| ·总RNA的提取 | 第66-67页 |
| ·反转录得到cDNA | 第67页 |
| ·qRT-PCR检测基因表达倍数的改变 | 第67-68页 |
| ·讨论与分析 | 第68-70页 |
| 第七章 总结与展望 | 第70-73页 |
| 参考文献 | 第73-83页 |
| 附录1 实验中所用的仪器设备 | 第83-84页 |
| 附录2 GP72 菌株oxyR基因测序结果 | 第84-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第88页 |
