| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 综述部分 | 第11-41页 |
| 第一章 马疱疹病毒1型病原学及其作为活病毒载体应用 | 第11-25页 |
| 1.EHV-1病毒学特性 | 第11-16页 |
| ·病毒分类及形态 | 第11页 |
| ·病毒复制 | 第11-12页 |
| ·部分糖蛋白及毒力基因 | 第12-15页 |
| ·流行 | 第15-16页 |
| 2.临床症状 | 第16-17页 |
| 3.动物模型 | 第17-18页 |
| 4.感染性细菌人工染色体 | 第18-19页 |
| 5.EHV-1作为活病毒载体的应用 | 第19-21页 |
| ·抗载体免疫及安全性 | 第19页 |
| ·外源基因包装能力 | 第19-21页 |
| 参考文献 | 第21-25页 |
| 第二章 SS2重要的保护性抗原及疫苗研究 | 第25-41页 |
| 1.病原学 | 第25页 |
| 2.流行病学 | 第25-26页 |
| 3.毒力因子及保护性抗原 | 第26-30页 |
| ·荚膜多糖(Capsular polysaccharide) | 第26-27页 |
| ·MPR(Muramidase-released protein)和EF(Extra-cellular protein factor) | 第27页 |
| ·溶血素(Suilysin,SLY) | 第27-29页 |
| ·-kDaprotein | 第29页 |
| ·GDH | 第29-30页 |
| ·次黄嘌呤核苷酸脱氢酶 | 第30页 |
| ·TRAG | 第30页 |
| 4.SS2的诊断及防制 | 第30-33页 |
| ·SS2的诊断 | 第30-31页 |
| ·疫苗的研究、应用及展望 | 第31-33页 |
| 参考文献 | 第33-41页 |
| 实验部分 | 第41-92页 |
| 第三章 EHV-1细菌人工染色体构建及鉴定 | 第41-57页 |
| 摘要 | 第41-42页 |
| 1.材料和方法 | 第42-47页 |
| ·转移载体p19_20/HA的构建 | 第42-43页 |
| ·转移载体线性化及转染鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组病毒的构建及纯化 | 第44页 |
| ·提取病毒基因组环状中间体 | 第44页 |
| ·电转化及p438/77的鉴定 | 第44-45页 |
| ·p438/77的传代稳定性及病毒的拯救 | 第45页 |
| ·转移载体p1920XM和r_4XM恢复株的构建 | 第45-46页 |
| ·病毒体外培养特性的鉴定 | 第46-47页 |
| 2.结果 | 第47-52页 |
| ·转移载体的构建及鉴定 | 第47-48页 |
| ·线性化转移载体转染RK13细胞 | 第48页 |
| ·重组病毒4/G株的构建和纯化 | 第48-49页 |
| ·病毒基因组环状中间体的提取及电转化大肠杆菌 | 第49页 |
| ·p438/77转染RK13拯救病毒 | 第49页 |
| ·无痕有标记r_4XM恢复株的构建 | 第49-51页 |
| ·体外培养特性的鉴定 | 第51-52页 |
| 3.结论和讨论 | 第52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| ABSTRACT | 第56-57页 |
| 第四章 SS2溶血素突变体在原核和真核细胞中表达、活性及抗原性鉴定 | 第57-76页 |
| 摘要 | 第57-59页 |
| 1.材料和方法 | 第59-63页 |
| ·基因克隆及质粒构建 | 第59-60页 |
| ·SS2溶血素的提取及单抗特异性鉴定 | 第60页 |
| ·溶血素及突变体的诱导表达及鉴定 | 第60-61页 |
| ·转染PK15细胞瞬时表达溶血素突变体 | 第61页 |
| ·溶血活性试验 | 第61-62页 |
| ·SLY和SLYm的细胞毒性 | 第62页 |
| ·小鼠毒力试验 | 第62页 |
| ·小鼠免疫试验 | 第62-63页 |
| 2.结果 | 第63-70页 |
| ·基因克隆及表达载体的构建 | 第63页 |
| ·抗链球菌2型溶血素单抗的特异性鉴定 | 第63-64页 |
| ·诱导表达及免疫转印鉴定 | 第64-66页 |
| ·真核细胞瞬时表达溶血素突变体 | 第66-67页 |
| ·溶血活性及抑制试验 | 第67页 |
| ·细胞毒性 | 第67-68页 |
| ·小鼠的毒力试验 | 第68-69页 |
| ·小鼠免疫试验 | 第69-70页 |
| 3.结论和讨论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-75页 |
| ABSTRACT | 第75-76页 |
| 第五章 表达SS2溶血素突变体及mrp基因片段EHV-1重组病毒的构建 | 第76-92页 |
| 摘要 | 第76-77页 |
| 1.材料与方法 | 第77-82页 |
| ·质粒、细菌、细胞和病毒 | 第77-78页 |
| ·DNA聚合酶N752缺失 | 第78-79页 |
| ·4△N多中Pcmv启动子的改造 | 第79页 |
| ·mrp基因片段瞬时表达及鉴定 | 第79-80页 |
| ·表达SS2mrp重组病毒的构建及鉴定 | 第80页 |
| ·表达SS2slyom重组病毒的构建及鉴定 | 第80-81页 |
| ·删除重组病毒的Mini-F序列 | 第81页 |
| ·小鼠免疫试验 | 第81-82页 |
| 2.结果 | 第82-88页 |
| ·DNA聚合酶N752缺失 | 第82-83页 |
| ·4△N株中Pcmv启动子的改造 | 第83页 |
| ·mrp基因片段瞬时表达及鉴定 | 第83页 |
| ·表达SS2MRP片段重组病毒的构建及鉴定 | 第83-85页 |
| ·表达SS2溶血素重组病毒的构建及鉴定 | 第85-86页 |
| ·删除重组病毒中mini-F序列 | 第86-87页 |
| ·小鼠免疫试验 | 第87-88页 |
| 3.结论和讨论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-91页 |
| ABSTRACT | 第91-92页 |
| 全文总结 | 第92-93页 |
| 附录引物及说明 | 第93-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
