| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词Abbreviations | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| 1 猪卵母细胞体外成熟的研究进展 | 第12-18页 |
| ·卵子发生过程 | 第12-13页 |
| ·卵母细胞体外成熟的意义 | 第13-14页 |
| ·茎环结构组蛋白(Stem-loop Histone) | 第14-16页 |
| ·茎环结合蛋白(Stem-loop binding protein) | 第16-18页 |
| 2 SLBP蛋白对卵母细胞成熟重要作用 | 第18-23页 |
| ·卵母细胞中母源信息的重要作用 | 第18-21页 |
| ·卵母细胞成熟受母源信息调控 | 第18-19页 |
| ·卵母细胞中母源mRNA表达调控 | 第19-21页 |
| ·SLBP蛋白参与组蛋白mRNAs的翻译调控 | 第21-22页 |
| ·SLBP蛋白参与组蛋白mRNAs的加工和转运 | 第22-23页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第23-26页 |
| 第二章 猪卵母细胞体外培养过程中SLBP表达研究 | 第26-44页 |
| 引言 | 第26页 |
| 1 材料与方法 | 第26-33页 |
| ·实验材料及采样方法 | 第26页 |
| ·核成熟程度的判断 | 第26-27页 |
| ·地衣红染色方法 | 第26-27页 |
| ·卵母细胞各个时期形态特征 | 第27页 |
| ·利用半定量RT-PCR技术检测卵母细胞成熟过程中SLBP mRNA的表达 | 第27-31页 |
| ·猪卵母细胞中总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·RNA纯度和完整性检测 | 第28页 |
| ·RT-PCR(cDNA第一链的合成) | 第28-29页 |
| ·引物设计与合成 | 第29页 |
| ·PCR扩增体系 | 第29-30页 |
| ·扩增循环次数的筛选 | 第30页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳及分析 | 第30-31页 |
| ·蛋白质免疫印迹(Western blotting) | 第31-32页 |
| ·细胞蛋白的提取 | 第31页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第31页 |
| ·转膜 | 第31-32页 |
| ·免疫反应 | 第32页 |
| ·化学发光,显影和定影 | 第32页 |
| ·数据处理与统计分析 | 第32-33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-38页 |
| ·卵母细胞核成熟情况 | 第33-35页 |
| ·卵母细胞总RNA提取结果 | 第35页 |
| ·SLBP PCR扩增结果及循环数的筛选 | 第35-36页 |
| ·猪卵母细胞中SLBP mRNA定量结果 | 第36-37页 |
| ·猪卵母细胞体外成熟中SLBP蛋白表达变化 | 第37-38页 |
| 3 讨论 | 第38-44页 |
| ·卵母细胞体外成熟进程的分期检测 | 第38-40页 |
| ·细胞核迁移现象 | 第39页 |
| ·卵母细胞体外成熟标志 | 第39-40页 |
| ·卵母细胞成熟过程中SLBP基因表达特异性 | 第40-44页 |
| ·卵母细胞成熟期转录沉默 | 第40-41页 |
| ·SLBP蛋白的磷酸化 | 第41-44页 |
| 第三章 猪SLBP基因克隆及其生物信息学分析 | 第44-62页 |
| 引言 | 第44页 |
| 1 材料与方法 | 第44-51页 |
| ·试验材料 | 第44页 |
| ·猪SLBP基因的扩增 | 第44-48页 |
| ·猪胎儿成纤维单层贴壁细胞总RNA的提取 | 第44-45页 |
| ·RNA纯度和完整性检测 | 第45页 |
| ·RT-PCR(cDNA第一链的合成) | 第45页 |
| ·引物设计与合成 | 第45-46页 |
| ·PCR扩增体系 | 第46-47页 |
| ·PCR扩增产物检测 | 第47页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第47-48页 |
| ·PCR扩增产物的克隆及测序 | 第48-51页 |
| ·克隆用载体 | 第48页 |
| ·纯化PCR产物与载体连接 | 第48-49页 |
| ·转化反应 | 第49页 |
| ·菌液PCR鉴定及测序 | 第49-50页 |
| ·测得序列的拼接 | 第50页 |
| ·序列选取及比对 | 第50-51页 |
| ·蛋白结构及功能位点预测 | 第51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-57页 |
| ·细胞总RNA提取结果 | 第51-52页 |
| ·猪SLBP基因的扩增情况 | 第52-54页 |
| ·单个片段PCR扩增结果 | 第52-54页 |
| ·序列拼接结果 | 第54页 |
| ·SLBP基因序列的生物信息学分析 | 第54-57页 |
| ·不同哺乳动物SLBP基因的同源性比较 | 第54-55页 |
| ·生物信息学推定猪SLBP的蛋白结构与功能预测 | 第55-56页 |
| ·不同物种SLBP编码的氨基酸序列比对 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-62页 |
| ·序列扩增的心得 | 第57-58页 |
| ·猪SLBP基因的克隆及其同源性的比对 | 第58-59页 |
| ·SLBP mRNAs翻译调控机制 | 第59-62页 |
| ·CPE参与的翻译抑制 | 第59页 |
| ·多聚腺苷酸化诱导母源mRNAs的翻译 | 第59-62页 |
| 第四章 全文结论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-74页 |
| 创新点 | 第74-76页 |
| 附录 | 第76-84页 |
| 附录1：主要仪器设备及化学试剂 | 第76-80页 |
| 附录2：猪SLBP基因部分cDNA序列 | 第80-81页 |
| 附录3：猪与其他哺乳动物的SLBP CDS区的多重比对 | 第81-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
