| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-16页 |
| 前言 | 第16-33页 |
| 第一章 A型血友病人非整合iPSCs的建立与鉴定 | 第33-73页 |
| ·实验材料 | 第33-38页 |
| ·主要实验仪器耗材 | 第33-35页 |
| ·主要实验试剂 | 第35-37页 |
| ·实验动物 | 第37页 |
| ·病例来源 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-59页 |
| ·A型血友病人尿细胞的分离与培养 | 第38-39页 |
| ·HA iPSCs的诱导 | 第39-41页 |
| ·人iPSCs/ESCs的培养与维持 | 第41-43页 |
| ·HA iPSCs的鉴定 | 第43-59页 |
| ·实验结果 | 第59-69页 |
| ·尿细胞来源的HA iPSCs的诱导 | 第59-60页 |
| ·HA iPSCs表达人胚胎干细胞特征多能性基因 | 第60-62页 |
| ·内源和外源多能性基因表达鉴定及外源基因非整合鉴定 | 第62-63页 |
| ·启动子去甲基化鉴定 | 第63-64页 |
| ·HA iPSCs的遗传学鉴定 | 第64-66页 |
| ·拟胚体体外自发分化及鉴定 | 第66-68页 |
| ·畸胎瘤体内分化及鉴定 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-73页 |
| 第二章 A型血友病人iPSCs体外定向肝分化 | 第73-84页 |
| ·实验材料 | 第74-76页 |
| ·主要实验仪器耗材 | 第74-75页 |
| ·主要实验试剂 | 第75-76页 |
| ·实验方法 | 第76-79页 |
| ·HA iPSCs体外定向分化为肝细胞 | 第76-77页 |
| ·免疫荧光鉴定肝细胞分化相关标志物的表达 | 第77-78页 |
| ·PAS糖原染色分析 | 第78-79页 |
| ·原代人肝细胞培养 | 第79页 |
| ·实验结果 | 第79-82页 |
| ·HA iPSCs体外定向分化为肝细胞样细胞 | 第79-80页 |
| ·HA iPSCs在肝分化过程中不同阶段表达相应的分子标志 | 第80-81页 |
| ·PAS糖原染色分析 | 第81-82页 |
| ·讨论 | 第82-84页 |
| 第三章 基于iPS技术的A型血友病细胞疾病模型的建立 | 第84-101页 |
| ·实验材料 | 第84-86页 |
| ·主要实验仪器耗材 | 第84-85页 |
| ·主要实验试剂 | 第85-86页 |
| ·实验方法 | 第86-91页 |
| ·人HA iPSCs的培养及HA iPSCs体外定向肝分化 | 第86-87页 |
| ·人正常肝细胞系HL7702的培养 | 第87页 |
| ·荧光定量PCR检测HA iPSCs分化肝细胞的FⅧ基因的表达 | 第87-88页 |
| ·免疫荧光鉴定FⅧ蛋白的表达 | 第88-89页 |
| ·培养细胞FⅧ活性检测 | 第89-90页 |
| ·统计学分析 | 第90-91页 |
| ·实验结果 | 第91-96页 |
| ·HA iPSCs分化的肝细胞不能正常转录FⅧ基因的mRNA | 第91页 |
| ·HA iPSCs分化的肝细胞不能表达正常的FⅧ蛋白 | 第91-92页 |
| ·培养细胞FⅧ活性检测结果及统计学分析 | 第92-96页 |
| ·讨论 | 第96-101页 |
| 结论 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-110页 |
| 英文缩略词表 | 第110-114页 |
| 攻读学位期间成果 | 第114-116页 |
| 致谢 | 第116-119页 |
| 统计学证明 | 第119页 |
