拟南芥抗灰葡萄孢毒素突变体筛选及其突变基因分析
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 前言 | 第10-25页 |
| 一、灰霉病发生与防治 | 第10-12页 |
| (一) 寄主植物种类 | 第10-11页 |
| (二) 病害流行特点 | 第11页 |
| (三) 防病措施与效果 | 第11-12页 |
| 二、灰葡萄孢的致病机制 | 第12-17页 |
| (一) 毒素 | 第12-15页 |
| (二) 胞壁降解酶 | 第15-16页 |
| (三) 其他 | 第16-17页 |
| 三、提高植物抗病性的途径 | 第17-19页 |
| (一) 植物抗病基因 | 第17页 |
| (二) 诱导抗性 | 第17-18页 |
| (三) 其它抗病因子 | 第18-19页 |
| 四、植物对灰葡萄孢的抗性机理 | 第19-21页 |
| (一) PGIP | 第19页 |
| (二) 几丁质酶 | 第19-20页 |
| (三) 植保素以及其它物质 | 第20-21页 |
| 五、拟南芥抗病研究 | 第21-24页 |
| (一) 拟南芥特性 | 第21-22页 |
| (二) 拟南芥抗灰葡萄孢机理 | 第22页 |
| (三) 拟南芥突变体库的构建和应用 | 第22-24页 |
| 六、本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 材料与方法 | 第25-36页 |
| 一、供试病原菌 | 第25页 |
| 二、供试植物 | 第25页 |
| 三、培养基及培养液 | 第25-26页 |
| (一) 真菌培养基 | 第25页 |
| (二) 毒素培养液 | 第25页 |
| (三) 拟南芥培养基 | 第25-26页 |
| (四) 拟南芥营养液配方 | 第26页 |
| 四、试剂和仪器 | 第26-28页 |
| (一) 主要试剂 | 第26-27页 |
| (二) 主要仪器 | 第27-28页 |
| 五、灰葡萄孢毒素的培养及提取 | 第28页 |
| 六、拟南芥的种植 | 第28-29页 |
| 七、拟南芥对毒素敏感性的检测方法 | 第29页 |
| (一) 胚根抑制法 | 第29页 |
| (二) 细胞膜透性检测法 | 第29页 |
| 八、毒素处理植株与病菌接种方法 | 第29-30页 |
| 九、拟南芥基因组DNA提取 | 第30页 |
| (一) DNA提取 | 第30页 |
| (二) DNA纯度和浓度测定 | 第30页 |
| 十、突变体T-DNA插入区序列测定方法 | 第30-36页 |
| (一) PCR引物设计 | 第30-31页 |
| (二) PCR反应体系 | 第31-33页 |
| (三) PCR反应条件 | 第33-35页 |
| (四) PCR产物纯化 | 第35页 |
| (五) 测序 | 第35页 |
| (六) 生物信息学分析 | 第35-36页 |
| 结果与分析 | 第36-54页 |
| 一、拟南芥对毒素的敏感性 | 第36-37页 |
| (一) 毒素对拟南芥胚根的抑制 | 第36页 |
| (二) 毒素对拟南芥细胞膜透性的影响 | 第36-37页 |
| 二、拟南芥对毒素敏感性的评价方法与标准 | 第37-38页 |
| 三、拟南芥抗毒素突变体的筛选 | 第38-40页 |
| (一) 筛选突变体 | 第38-39页 |
| (二) AM-96突变体验证 | 第39-40页 |
| 四、突变体基因分析 | 第40-43页 |
| (一) 突变体T-DNA标记基因序列检测 | 第40-43页 |
| (二) 突变位点基因序列分析 | 第43页 |
| 五、KMPR基因分析 | 第43-47页 |
| 六、KMPR生物信息学分析 | 第47-54页 |
| (一) 蛋白质一级结构 | 第47页 |
| (二) 蛋白质二级结构 | 第47-49页 |
| (三) 蛋白质性质与功能 | 第49-52页 |
| (四) KMPR蛋白系统进化 | 第52-54页 |
| 讨论 | 第54-56页 |
| 一、针对病菌毒素提高植物抗病性 | 第54页 |
| 二、毒素与植物抗病性鉴定 | 第54-55页 |
| 三、驱动蛋白 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 附录 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
