| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 综述 | 第10-16页 |
| 第一节 Akt的概述 | 第10-12页 |
| ·PI3K-Akt信号通路 | 第10-11页 |
| ·Akt的结构及其生化特性 | 第11页 |
| ·Akt的生物学功能 | 第11页 |
| ·Akt与癌症的关系 | 第11-12页 |
| 第二节 SUMO化修饰及其功能的概述 | 第12-15页 |
| ·SUMO分子的发现及其结构 | 第12-13页 |
| ·SUMO化修饰过程及其酶 | 第13-15页 |
| ·SUMO化修饰的生物学功能 | 第15页 |
| 第三节 本研究的理论依据与意义 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-28页 |
| 第一节 实验材料 | 第16-18页 |
| ·细胞 | 第16页 |
| ·细胞培养用试剂 | 第16页 |
| ·主要试剂 | 第16-18页 |
| 第二节 实验方法 | 第18-28页 |
| ·Akt1蛋白质序列的生物信息学分析 | 第18页 |
| ·实验所需各类质粒的获得 | 第18-19页 |
| ·实验所需表达载体的构建 | 第19-21页 |
| ·细胞培养与转染 | 第21-22页 |
| ·体内SUMO实验 | 第22页 |
| ·体外SUMO实验 | 第22-23页 |
| ·免疫荧光染色实验 | 第23-24页 |
| ·免疫印迹实验(Western Blot) | 第24-26页 |
| ·免疫共沉淀实验(Co-IP) | 第26页 |
| ·BIFC | 第26-27页 |
| ·核质分离 | 第27-28页 |
| 第三章 结果与分析 | 第28-42页 |
| 第一节 Akt1能发生SUMO化修饰 | 第28-30页 |
| ·Akt1在体内的SUMO化修饰 | 第28页 |
| ·Akt1的体外SUMO化修饰 | 第28-29页 |
| ·内源Akt的SUMO化修饰 | 第29-30页 |
| ·Akt1的突变体能发生SUMO化修饰 | 第30页 |
| 第二节 PIAS1是Akt1SUMO化修饰的E3连接酶 | 第30-32页 |
| ·PIAS1能够促进体内的Akt1SUMO化修饰 | 第30-31页 |
| ·细胞内Akt1与PIAS1的相互作用 | 第31-32页 |
| ·细胞内Akt1的缺失突变体与PIAS1的相互作用 | 第32页 |
| 第三节 SENP1能使Akt1去SUMO化修饰 | 第32-34页 |
| 第四节 Akt的SUMO化修饰发生在细胞核内 | 第34-36页 |
| ·BIFC | 第34-35页 |
| ·NES-Akt,NLS-Akt的定位 | 第35页 |
| ·核质分离 | 第35-36页 |
| 第五节 Akt1的SUMO化修饰位点 | 第36-40页 |
| ·Akt1缺失突变体都能发生SUMO化修饰 | 第36-37页 |
| ·Akt1的SUMO化修饰位点的预测 | 第37-38页 |
| ·K276R是Akt1发生SUMO化修饰的主要位点 | 第38-40页 |
| 第六节 SUMO化修饰对Akt1的细胞生物学功能的影响 | 第40-42页 |
| 6-1 Akt1的SUMO化修饰可能影响Akt1在细胞内的定位 | 第40-41页 |
| 6-2 Akt1的SUMO化修饰可能影响Akt1的活性 | 第41-42页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第42-44页 |
| 附录 | 第44-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
