| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| ·鱼类病毒性出血性败血症病毒 | 第11-20页 |
| ·生物学特征 | 第11-12页 |
| ·临床症状 | 第12-13页 |
| ·流行特点 | 第13-14页 |
| ·VHSV分类地位 | 第14页 |
| ·VHSV基因组及结构蛋白特征 | 第14-17页 |
| ·VHSV的基因分型 | 第17-18页 |
| ·VHSV检测方法 | 第18-19页 |
| ·单克隆抗体在VHSV研究中的应用 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第20-22页 |
| 第二章 病毒性出血性败血症病毒单克隆抗体的制备 | 第22-43页 |
| ·材料与方法 | 第22-32页 |
| ·毒株、实验动物和细胞 | 第22页 |
| ·试验试剂 | 第22页 |
| ·试验溶液的配制 | 第22-24页 |
| ·试验仪器 | 第24-25页 |
| ·VHSV的增殖与纯化 | 第25页 |
| ·免疫小鼠 | 第25页 |
| ·间接ELISA筛选方法的建立 | 第25-26页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第26页 |
| ·SP2/0骨髓瘤细胞的准备 | 第26页 |
| ·免疫脾细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·细胞融合 | 第27页 |
| ·杂交瘤细胞上清检测 | 第27页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化(有限稀释法) | 第27-28页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第28页 |
| ·杂交瘤细胞染色体数的分析 | 第28-29页 |
| ·VHSV单克隆抗体的大量制备及其效价测定 | 第29页 |
| ·VHSV单克隆抗体的亚类鉴定 | 第29页 |
| ·VHSV腹水抗体的纯化 | 第29-30页 |
| ·交叉反应试验 | 第30页 |
| ·间接免疫荧光试验 | 第30页 |
| ·Western blot分析 | 第30页 |
| ·VHSV双抗体夹心ELISA检测方法的建立 | 第30-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-39页 |
| ·VHSV的增殖及纯化 | 第32页 |
| ·间接ELISA筛选方法的建立 | 第32-33页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第33页 |
| ·杂交瘤细胞染色体数的分析 | 第33-34页 |
| ·单克隆抗体效价的测定 | 第34页 |
| ·单克隆抗体的亚类鉴定结果 | 第34页 |
| ·腹水抗体的纯化 | 第34-35页 |
| ·交叉反应试验 | 第35页 |
| ·间接免疫荧光试验 | 第35-36页 |
| ·Western blot分析 | 第36页 |
| ·单抗包被浓度与二抗工作浓度确定 | 第36-37页 |
| ·双抗体夹心ELISA结果判定标准 | 第37页 |
| ·特异性试验结果 | 第37-38页 |
| ·敏感性试验结果 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-43页 |
| ·VHSV的增殖及纯化 | 第39页 |
| ·小鼠免疫 | 第39页 |
| ·细胞融合 | 第39-40页 |
| ·单克隆抗体的筛选 | 第40页 |
| ·单克隆抗体纯化 | 第40-41页 |
| ·单克隆抗体特异性分析 | 第41页 |
| ·VHSV双抗体夹心ELISA检测方法的建立 | 第41-43页 |
| 第三章 VHSV核蛋白基因的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第43-57页 |
| ·材料与方法 | 第43-52页 |
| ·毒株、细胞、菌株与质粒 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·试验溶液的配制 | 第43-44页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·引物设计 | 第44页 |
| ·核蛋白VHSV-N基因的克隆 | 第44-48页 |
| ·重组表达质粒pET28a-N的构建及鉴定 | 第48-49页 |
| ·VHSV核蛋白的诱导表达 | 第49-50页 |
| ·表达蛋白的复性 | 第50页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第50页 |
| ·表达蛋白抗原性的检测 | 第50-51页 |
| ·表达蛋白抗血清的制备 | 第51页 |
| ·抗血清效价的测定 | 第51页 |
| ·Western blot检测抗血清特异性 | 第51-52页 |
| ·结果与分析 | 第52-55页 |
| ·N基因的扩增及重组质粒的鉴定 | 第52页 |
| ·重组表达质粒pET28a-N的鉴定 | 第52页 |
| ·核蛋白的诱导表达 | 第52-53页 |
| ·表达蛋白的复性与纯化 | 第53-54页 |
| ·表达蛋白免疫原性的检测 | 第54-55页 |
| ·多抗血清效价和特异性检测 | 第55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-66页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |