| 缩略语表 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 文献综述 | 第15-32页 |
| 1 直结肠癌 | 第15-24页 |
| ·直结肠癌的流行病学研究 | 第15-16页 |
| ·直结肠癌的发病 | 第16-17页 |
| ·结直肠癌的现代化治疗 | 第17-22页 |
| ·结直肠癌的中药治疗 | 第22-24页 |
| 2. HGF/c-Met信号转导通 | 第24-30页 |
| ·HGF/c-Met信号转导通的构成 | 第24-26页 |
| ·HGF/c-Met信号转导通路与肿瘤生长、侵袭、转移的关系 | 第26-29页 |
| ·HGF/sF及其受体c-met在大肠癌细胞中的表达及意义 | 第29-30页 |
| 3. 血清药理学 | 第30-31页 |
| 4. 灵芪胶囊 | 第31-32页 |
| 实验部分 | 第32-75页 |
| 实验一 灵芪胶囊对人源性直结肠癌lovo细胞的体外抑制作用 | 第32-40页 |
| 1 实验材料 | 第32-34页 |
| ·实验瘤株 | 第32页 |
| ·试验用药品 | 第32页 |
| ·实验主要试剂 | 第32页 |
| ·实验主要仪器 | 第32-33页 |
| ·实验溶液的配置 | 第33-34页 |
| ·实验动物及饲养 | 第34页 |
| 2. 实验原理 | 第34-35页 |
| ·MTT法实验原理 | 第34页 |
| ·细胞凋亡于坏死检测方法 | 第34-35页 |
| 3. 试验方法 | 第35-37页 |
| ·实验血清的制备 | 第35页 |
| ·细胞的复苏 | 第35页 |
| ·细胞的培养 | 第35-36页 |
| ·细胞冻存 | 第36页 |
| ·MTT法研究体外实验中灵芪胶囊对lovo细胞的抑制作用 | 第36-37页 |
| ·Hochest 33342检测细胞的凋亡情况 | 第37页 |
| 4. 实验结果 | 第37-40页 |
| ·MTT实验结果 | 第37-39页 |
| ·hochest 33342染色的结果 | 第39-40页 |
| 实验二 灵芪胶囊对人源性直结肠癌lovo细胞凋亡的影响 | 第40-44页 |
| 1 实验材料 | 第40页 |
| 2. 实验原理：Annexin Ⅴ-FITC细胞凋亡检测原理 | 第40页 |
| 3. 实验方法 | 第40-41页 |
| ·分组及给药 | 第40-41页 |
| ·收集细胞 | 第41页 |
| ·细胞计数 | 第41页 |
| ·取5-10万重悬的细胞，lOOOg离心5分钟，弃上清，加入195^11 AnnexinV-FITC结合液轻轻重悬细胞 | 第41页 |
| ·nA5|alAnnexinV-FITC，轻轻混匀 | 第41页 |
| ·室温（20-25°(：)避光!浮育10分钟。可以使用招箱进行避光 | 第41页 |
| ·lOOOg离心5分钟，弃上清，加入1 901^1 Annexin V-FITC结合液轻轻悬细胞 | 第41页 |
| ·加入10^11碘化丙淀染色液，轻轻混勾，冰浴避光放置 | 第41页 |
| ·流式检测和分析 | 第41页 |
| ·应用MOdiFit软件计算出各时相分布的百分比 | 第41页 |
| 4. 实验结果 | 第41-44页 |
| ·结果判断 | 第42页 |
| ·统计学分析 | 第42页 |
| ·实验结果 | 第42-44页 |
| 实验三 灵芪胶囊对人源性直结肠癌lovo细胞形态学的影响 | 第44-49页 |
| 1. 实验材料 | 第44-45页 |
| ·材料与试剂 | 第44-45页 |
| ·实验仪器 | 第45页 |
| 2. 操作方法 | 第45-47页 |
| ·取材与固定 | 第45页 |
| ·洗涤 | 第45页 |
| ·固定 | 第45页 |
| ·洗涤 | 第45-46页 |
| ·丙酮梯度脱水 | 第46页 |
| ·包埋与渗透 | 第46页 |
| ·聚合 | 第46-47页 |
| ·标本的修整 | 第47页 |
| ·半薄切片的制备 | 第47页 |
| ·超薄切片的定位 | 第47页 |
| ·载网 | 第47页 |
| ·3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色 | 第47页 |
| 3. 实验结果 | 第47-49页 |
| 实验四 Real-time PCR检测lovo细胞HGF/SF-met通路关键位点的基因表达 | 第49-59页 |
| 1. 实验材料 | 第49页 |
| ·仪器 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| 2. real-time PCR原理 | 第49页 |
| 3. 实验方法 | 第49-53页 |
| ·Trizol法提取总RNA | 第50-51页 |
| ·总RNA反转录为cDNA | 第51页 |
| ·Real-time PCR分析 | 第51-52页 |
| ·数据处理 | 第52页 |
| ·统计学分析 | 第52-53页 |
| ·检测总RNA纯度 | 第53页 |
| 4. 实验结果 | 第53-59页 |
| ·HGF的mRNA表达 | 第53-56页 |
| ·PTK mRNA表达 | 第56-57页 |
| ·c-met mRNA的表达 | 第57-59页 |
| 实验五 western blot法检测灵芪胶囊对lovo细胞HGF/SF-met通路上关键位点的影响 | 第59-71页 |
| 1. 实验材料 | 第59-61页 |
| ·实验仪器设备 | 第59页 |
| ·实验试剂 | 第59页 |
| ·实验所需溶液的配置 | 第59-61页 |
| 2. 实验原理 | 第61-63页 |
| 3. 实验方法 | 第63-67页 |
| ·分组 | 第63页 |
| ·总蛋白的提取 | 第63页 |
| ·测Pr含量 | 第63-64页 |
| ·冻存变形的Pr | 第64页 |
| ·Western Blot具体步骤 | 第64-66页 |
| ·统计学分析 | 第66-67页 |
| 4. 实验结果 | 第67-71页 |
| ·WB法检测HGF的结果 | 第67-68页 |
| ·WB法检测PTK表达的结果 | 第68-69页 |
| ·WB法检测c-met蛋白含量 | 第69-71页 |
| 实验六 应用免疫荧光法检测蛋白表达的位置 | 第71-75页 |
| 1. 实验材料 | 第71页 |
| ·实验设备 | 第71页 |
| ·实验试剂 | 第71页 |
| 2. 试验方法 | 第71-72页 |
| 3. 实验结果 | 第72-75页 |
| ·结果的判定 | 第72页 |
| ·统计学分析 | 第72页 |
| ·实验结果 | 第72-75页 |
| 讨论 | 第75-88页 |
| 1. HGF/SF-met信号通路 | 第75-82页 |
| ·HGF/sF | 第75页 |
| ·c-met | 第75-79页 |
| ·PTK | 第79-81页 |
| ·HGF/SF-met信号通路促肿瘤转移的机制 | 第81-82页 |
| 2. 实验细胞株的选择 | 第82-83页 |
| 3. 灵芪胶囊的研究 | 第83-84页 |
| 4. 给药时间点 | 第84-85页 |
| 5. 抗原抗体反应 | 第85页 |
| 6. WB的操作 | 第85-88页 |
| 结论 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-99页 |
| 附图 | 第99-108页 |
| 论文情况 | 第108-110页 |
| 个人简历 | 第110-111页 |
