| 中文摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-20页 |
| 符号说明 | 第20-21页 |
| 第一章 前言 | 第21-43页 |
| ·干旱胁迫对植物的影响 | 第21-24页 |
| ·植物的抗旱机制 | 第24-30页 |
| ·植物抗旱的形态特征 | 第24页 |
| ·植物抗旱的分子机制 | 第24-30页 |
| ·渗透保护物质(相容性溶质)作用 | 第24-26页 |
| ·水通道蛋白(Aquaporins,AQPs)参与植物对干旱胁迫的反应 | 第26-27页 |
| ·热激蛋白的保护作用 | 第27页 |
| ·胚胎晚期丰富蛋白的作用 | 第27-28页 |
| ·抗氧化防御系统 | 第28-29页 |
| ·DREB/CBF转录因子调控植物抗逆性 | 第29-30页 |
| ·甜菜碱合成机制在植物基因工程中的应用 | 第30-38页 |
| ·甜菜碱的生物合成途径 | 第30-31页 |
| ·甜菜碱的植物基因工程研究 | 第31-36页 |
| ·胆碱氧化合成甜菜碱途径的植物基因工程 | 第32-35页 |
| ·甘氨酸甲基化合成甜菜碱途径的植物基因工程 | 第35-36页 |
| ·甜菜碱的抗逆作用机制 | 第36-38页 |
| ·渗透调节作用 | 第36页 |
| ·稳定和保护生物大分子的天然结构和功能 | 第36-37页 |
| ·膜的完整性 | 第37页 |
| ·甜菜碱影响基因表达 | 第37-38页 |
| ·黑麦草基因工程改良研究进展 | 第38-41页 |
| ·提高牧草品质 | 第39页 |
| ·提高抗病害能力 | 第39页 |
| ·抗除草剂品种的培育 | 第39-40页 |
| ·控制花粉过敏原的产生 | 第40页 |
| ·提高逆境抗性 | 第40-41页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第41-43页 |
| 第二章 甘氨酸甲基化合成甜菜碱途径中相关基因的克隆与功能分析 | 第43-75页 |
| ·材料与方法 | 第43-58页 |
| ·藻种及其培养 | 第43-44页 |
| ·植物材料 | 第44页 |
| ·菌种及质粒载体 | 第44页 |
| ·嗜盐隐杆藻基因组DNA的提取 | 第44-45页 |
| ·嗜盐隐杆藻GSMT和DMT基因的克隆 | 第45-46页 |
| ·引物和PCR反应 | 第45-46页 |
| ·PCR产物的回收、克隆及测序 | 第46页 |
| ·基因的生物信息学分析 | 第46页 |
| ·质粒重组和鉴定 | 第46-50页 |
| ·基本分子生物学操作 | 第46-47页 |
| ·ApGSMT2和ApDMT2基因原核共表达质粒构建路线 | 第47-48页 |
| ·ApGSMT2和ApDMT2基因双子叶植物共表达质粒的构建路线 | 第48-50页 |
| ·ApGSMT2和ApDMT2蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第50-51页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌 | 第50页 |
| ·目的蛋白的诱导和大肠杆菌可溶性蛋白的制备 | 第50-51页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第51页 |
| ·可溶性蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第51页 |
| ·ApGSMT2和ApDMT2基因在大肠杆菌中的功能验证 | 第51-52页 |
| ·大肠杆菌耐盐生长实验 | 第51页 |
| ·大肠杆菌中甜菜碱含量的测定 | 第51-52页 |
| ·转基因烟草的获得 | 第52-54页 |
| ·重组质粒转化农杆菌 | 第52页 |
| ·农杆菌介导的烟草叶盘转化 | 第52-53页 |
| ·转化植株的PCR检测 | 第53-54页 |
| ·转ApGSMT2和ApDMT2基因烟草的抗旱性实验 | 第54-58页 |
| ·植物材料 | 第54页 |
| ·转基因烟草的Southern杂交检测 | 第54-55页 |
| ·半定量RT-PCR检测 | 第55-56页 |
| ·烟草种子萌发实验 | 第56页 |
| ·烟草幼苗的干旱胁迫实验 | 第56页 |
| ·盆栽烟草的干旱胁迫处理 | 第56-57页 |
| ·烟草叶片甜菜碱含量的测定 | 第57页 |
| ·叶片相对含水量的测定 | 第57页 |
| ·叶片细胞膜离子渗漏率的测定 | 第57页 |
| ·叶片细胞膜丙二醛含量的测定 | 第57-58页 |
| ·光合作用和叶绿素荧光参数测定 | 第58页 |
| ·叶片游离氨基酸含量的测定 | 第58页 |
| ·数值统计分析 | 第58页 |
| ·结果与分析 | 第58-70页 |
| ·嗜盐隐杆藻GSMT和DMT基因的克隆 | 第58-60页 |
| ·嗜盐隐杆藻GR02基因组DNA的提取 | 第58-59页 |
| ·嗜盐隐杆藻GSMT基因的克隆 | 第59页 |
| ·嗜盐隐杆藻DMT基因的克隆 | 第59-60页 |
| ·嗜盐隐杆藻GR02中GSMT和DMT基因的序列分析 | 第60-62页 |
| ·原核共表达载体pET-30a(+)GSD的鉴定 | 第62-63页 |
| ·ApGSMT2和ApDMT2蛋白在大肠杆菌中的共表达 | 第63页 |
| ·ApGSMT2和ApDMT2基因在大肠杆菌中的功能验证 | 第63-64页 |
| ·双子叶植物共表达载体pCPE-GSD的酶切鉴定 | 第64-65页 |
| ·转ApGSMT2和ApDMT2基因烟草的抗旱性分析 | 第65-70页 |
| ·转基因烟草的分子生物学检测 | 第65页 |
| ·干旱胁迫下转基因烟草的种子萌发率和幼苗生长状态 | 第65-66页 |
| ·干旱胁迫前后转基因烟草甜菜碱含量的变化 | 第66-68页 |
| ·干旱胁迫对转基因烟草叶片相对含水量的影响 | 第68页 |
| ·干旱胁迫对不同株系叶片细胞受损程度的影响 | 第68-69页 |
| ·干旱胁迫对光合作用的影响 | 第69-70页 |
| ·转ApGSMT2和ApDMT2基因烟草的游离氨基酸含量 | 第70页 |
| ·讨论 | 第70-75页 |
| 第三章 转ApGSMT2和ApDMT2基因黑麦草的产生与抗旱性分析 | 第75-109页 |
| ·材料与方法 | 第75-83页 |
| ·pCUE-GSD质粒的构建 | 第75-77页 |
| ·菌种和质粒 | 第75页 |
| ·构建路线 | 第75-77页 |
| ·农杆菌介导的黑麦草遗传转化 | 第77-79页 |
| ·转基因受体品种 | 第77页 |
| ·培养基 | 第77-78页 |
| ·菌种和质粒 | 第78页 |
| ·黑麦草遗传转化 | 第78-79页 |
| ·转化小苗的除草剂筛选与PCR检测 | 第79页 |
| ·转基因黑麦草抗旱性分析 | 第79-83页 |
| ·黑麦草材料 | 第79-80页 |
| ·转基因黑麦草的Southern杂交检测和基因表达分析 | 第80页 |
| ·黑麦草苗期干旱胁迫处理 | 第80-81页 |
| ·黑麦草的根系观察和生物量统计方法 | 第81页 |
| ·生理生化指标测定方法 | 第81-82页 |
| ·干旱胁迫相关基因的表达分析 | 第82-83页 |
| ·结果与分析 | 第83-103页 |
| ·单子叶植物共表达载体质粒pCUE-GSD的鉴定 | 第83-84页 |
| ·转ApGSMT2和ApDMT2基因黑麦草植株的获得 | 第84-87页 |
| ·多年生黑麦草转基因植株的获得 | 第84-85页 |
| ·一年生黑麦草转基因植株的获得 | 第85-87页 |
| ·转基因黑麦草的Southern杂交和转基因表达分析 | 第87-88页 |
| ·转基因黑麦草的抗旱性分析 | 第88-99页 |
| ·干旱胁迫下转基因黑麦草的生长状态和叶片相对含水量 | 第88-90页 |
| ·转基因黑麦草的叶片甜菜碱含量 | 第90-91页 |
| ·干旱胁迫对转基因黑麦草中ApGSMT2和ApDMT2基因表达的影响 | 第91-92页 |
| ·干旱胁迫对转基因黑麦草的根系形态和生物量的影响 | 第92-94页 |
| ·干旱胁迫对转基因黑麦草叶片细胞膜损伤的影响 | 第94-95页 |
| ·干旱胁迫对转基因黑麦草光合作用的影响 | 第95-97页 |
| ·干旱胁迫对黑麦草转基因植株可溶性糖含量的影响 | 第97-98页 |
| ·转基因黑麦草的游离氨基酸含量分析 | 第98-99页 |
| ·干旱胁迫相关基因在转基因黑麦草中的表达分析 | 第99-103页 |
| ·讨论 | 第103-109页 |
| ·转ApGSMT2和ApDMT2基因提高了黑麦草的抗旱性 | 第103-105页 |
| ·干旱对转基因黑麦草游离氨基酸含量的影响 | 第105-106页 |
| ·甜菜碱积累对黑麦草基因表达的影响 | 第106-109页 |
| 第四章 总结与展望 | 第109-112页 |
| 参考文献 | 第112-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第129-130页 |
| 附录 | 第130页 |
