| 中文摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 符号说明 | 第14-15页 |
| 前言 | 第15-19页 |
| 第一部分 前列腺素E_1对H_2O_2诱导的血管内皮细胞氧化损伤的保护作用 | 第19-42页 |
| 一、实验材料 | 第19-20页 |
| (一) 药品及试剂 | 第19页 |
| (二) 主要仪器 | 第19-20页 |
| (三) 细胞 | 第20页 |
| 二、实验方法 | 第20-29页 |
| (一) 细胞培养及分组 | 第20-21页 |
| 1 细胞培养 | 第20页 |
| 2 氧化损伤模型的建立 | 第20-21页 |
| 3 细胞分组及处理 | 第21页 |
| (二) 实验项目及检测指标 | 第21-28页 |
| 1 细胞活性的测定 | 第21-22页 |
| ·MTT法检测细胞活力 | 第21页 |
| ·上清中LDH含量测定 | 第21-22页 |
| 2 细胞内氧化-抗氧化能力的测定 | 第22-25页 |
| ·酶生化法测定MDA含量、GSH-Px和SOD活力 | 第22-25页 |
| ·丙二醛(MDA)含量测定 | 第22-23页 |
| ·超氧化物歧化酶(SOD)活力测定 | 第23-24页 |
| ·谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力测定 | 第24-25页 |
| ·流式细胞仪测细胞内活性氧 | 第25页 |
| 3 细胞凋亡的测定 | 第25-26页 |
| ·Hoechst 33258/PI荧光染色法观察细胞核形态 | 第25页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡率 | 第25-26页 |
| 4 一氧化氮(NO)的测定 | 第26-28页 |
| ·上清液中NO含量的测定 | 第26页 |
| ·Western blotting法测定eNOS蛋白表达 | 第26-27页 |
| ·Realtime PCR法测定eNOS mRNA表达 | 第27-28页 |
| (三) 数据处理 | 第28-29页 |
| 三、实验结果 | 第29-36页 |
| (一) 氧化损伤模型的建立 | 第29页 |
| (二) PGE_1对H_2O_2损伤HUVECs细胞活性的影响 | 第29-30页 |
| 1 PGE_1对H_2O_2损伤HUVECs细胞生存率的影响 | 第29页 |
| 2 PGE_1对H_2O_2损伤HUVECs细胞LDH释放率的影响 | 第29-30页 |
| (三) PGE_1对H_2O_2损伤HUVECs细胞产生自由基的影响 | 第30-32页 |
| 1 PGE_1对H_2O_2损伤HUVECs细胞MDA含量、SOD和GSH-Px活力的影响 | 第30-31页 |
| ·PGE_1对H_2O_2损伤HUVECs细胞内SOD活力的影响 | 第30页 |
| ·PGE_1对H_2O_2损伤HUVECs细胞内GSH-Px含量的影响 | 第30-31页 |
| ·PGE_1对H_2O_2损伤HUVECs细胞内MDA含量的影响 | 第31页 |
| 2 PGE_1对H_2O_2损伤HUVECs细胞内ROS荧光强度的影响 | 第31-32页 |
| (四) PGE_1对H_2O_2损伤HUVECs细胞凋亡的影响 | 第32-35页 |
| 1 PGE_1对H_2O_2损伤HUVECs细胞染色质的影响 | 第32-34页 |
| 2 PGE_1对H_2O_2损伤HUVECs细胞凋亡率的影响 | 第34-35页 |
| (五) PGE_1对H_2O_2损伤HUVECs细胞产生NO的影响 | 第35-36页 |
| 1 PGE_1对H_2O_2损伤HUVECs细胞产生NO的影响 | 第35页 |
| 2 PGE_1对H_2O_2损伤HUVECs细胞eNOS蛋白质和mRNA水平的影响 | 第35-36页 |
| 四、讨论 | 第36-41页 |
| 五、小结 | 第41-42页 |
| 第二部分 前列腺素E_1对TNF-α诱导的血管内皮细胞炎症损伤的保护作用 | 第42-56页 |
| 一、实验材料 | 第42页 |
| (一) 药品及试剂 | 第42页 |
| (二) 主要仪器 | 第42页 |
| (三) 细胞 | 第42页 |
| 二、实验方法 | 第42-47页 |
| (一) 细胞培养及分组 | 第42-43页 |
| 1. 细胞培养 | 第42页 |
| 2. 炎症损伤模型的建立 | 第42-43页 |
| 3. 细胞分组及处理 | 第43页 |
| (二) 实验项目及检测指标 | 第43-47页 |
| 1. MTT法检测细胞活力 | 第43页 |
| 2. ELISA法测定细胞膜表面黏附分子ICAM-1、VCAM-1和E-selectin的表达 | 第43-44页 |
| 3. RT-PCR法测定ICAM-1、VCAM-1和E-selectin的mRNA表达 | 第44-46页 |
| 4. 单核-内皮细胞黏附实验 | 第46页 |
| 5. 细胞内ROS的测定 | 第46页 |
| 6. Western blotting法测定胞质和胞核NF-κB(p65)蛋白表达 | 第46-47页 |
| (三) 数据处理 | 第47页 |
| 三、实验结果 | 第47-52页 |
| (一) 炎症损伤模型的建立 | 第47-48页 |
| (二) PGE_1对TNF-α损伤HUVEC细胞活性的影响 | 第48页 |
| (三) PGE_1对TNF-α损伤内皮细胞表面VCAM-1,ICAM-1和E-selectin表达的影响 | 第48-50页 |
| (四) PGE_1对单核THP-1细胞与TNF-α诱导的HUVEC的黏附影响 | 第50页 |
| (五) PGE_1对TNF-α损伤HUVECs细胞内ROS荧光强度的影响 | 第50-51页 |
| (六) PGE_1对TNF-α诱导的HUVEC细胞中NF-κB(p65)核转位的影响 | 第51-52页 |
| 四、讨论 | 第52-55页 |
| 五、小结 | 第55-56页 |
| 全文结论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读硕士学位论文期间发表的论文 | 第69-70页 |
| 文献综述 | 第70-86页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第86页 |
