| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词 | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-22页 |
| 一、研究背景 | 第9-21页 |
| ·细菌的群体感应效应 | 第9-11页 |
| ·第二信使C-di-GMP | 第11-14页 |
| ·C-di-GMP的生物功能 | 第14-15页 |
| ·C-di-GMP的作用机制 | 第15-18页 |
| ·大肠杆菌中的QS系统和C-di-GMP信号通路 | 第18-21页 |
| 二、本文的主要内容、目的、意义及创新点 | 第21-22页 |
| 第二章 蛋白的表达纯化 | 第22-44页 |
| ·材料与方法 | 第22-26页 |
| ·菌株及质粒 | 第22页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第22-26页 |
| ·实验方法 | 第26-33页 |
| ·YdiV及YdaM的序列分析 | 第26页 |
| ·PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳 | 第26-27页 |
| ·PCR产物回收 | 第27-28页 |
| ·限制性内切酶切PCR产物 | 第28页 |
| ·表达载体的制备 | 第28-30页 |
| ·连接 | 第30页 |
| ·转化 | 第30页 |
| ·重组蛋白质的诱导表达 | 第30-31页 |
| ·测序鉴定重组质粒 | 第31页 |
| ·蛋白质的大量表达 | 第31页 |
| ·重组蛋白质的纯化 | 第31-33页 |
| ·实验结果及分析 | 第33-44页 |
| ·YdiV及YdaM的序列分析结果 | 第33-35页 |
| ·PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳结果 | 第35-36页 |
| ·限制性内切酶双酶切PCR产物 | 第36-37页 |
| ·限制性内切酶双酶切pET15b、pGL01、pET21b载体 | 第37-38页 |
| ·重组质粒测序鉴定 | 第38页 |
| ·重组蛋白小量检测 | 第38-40页 |
| ·重组蛋白的大量表达与纯化 | 第40-44页 |
| 第三章 蛋白质的晶体生长与结构解析 | 第44-50页 |
| ·材料与试剂 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-45页 |
| ·结晶方法:气相扩散法(悬滴法和坐滴法) | 第44页 |
| ·解相位方法:拟采用单波长反常散射法(SAD) | 第44页 |
| ·结构解析相关软件:HKL2000,Coot,PHENIX,CCP4等 | 第44页 |
| ·YdiV和YdaM的晶体生长 | 第44页 |
| ·晶体衍射数据的收集与处理 | 第44-45页 |
| ·实验结果及分析 | 第45-50页 |
| ·YdiV晶体生长 | 第45-46页 |
| ·YdaM晶体生长 | 第46页 |
| ·YdiV晶体衍射数据的收集与处理 | 第46-50页 |
| 第四章 蛋白部分生化功能研究 | 第50-61页 |
| ·材料与试剂 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-55页 |
| ·基因敲除 | 第50-52页 |
| ·生物膜检测-气液界面法 | 第52-53页 |
| ·胞外酶活检测 | 第53-55页 |
| ·实验结果及分析 | 第55-61页 |
| ·YdiV与YdaM对生物膜的影响 | 第55-56页 |
| ·YdiV、YdaM胞外酶活检测 | 第56-61页 |
| 总结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 附录 | 第67-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第72页 |