| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-20页 |
| 前言 | 第20-22页 |
| 第一章 骨髓间质干细胞的分离与培养 | 第22-31页 |
| ·材料与方法 | 第22-25页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·方法 | 第23-25页 |
| ·人骨髓MSCs的分离和体外培养 | 第23页 |
| ·MSCs的形态学观察 | 第23页 |
| ·生长曲线的绘制 | 第23页 |
| ·人骨髓MSCs的体外诱导分化 | 第23-25页 |
| ·结果 | 第25-29页 |
| ·MSCs的形态学观察和传代培养 | 第25-27页 |
| ·生长曲线的绘制 | 第27页 |
| ·人MSCs体外向成骨细胞、成脂细胞诱导分化 | 第27-29页 |
| ·讨论 | 第29-31页 |
| 第二章 骨髓MSCs条件培养液对诱导人巨核细胞系Meg-01细胞分化的作用 | 第31-41页 |
| ·材料与方法 | 第31-35页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-35页 |
| ·骨髓MSCs条件培养液(MSCs-CM)的制备 | 第32页 |
| ·Meg-01人巨核细胞系细胞NF-E2的表达 | 第32-33页 |
| ·Atlas Human cDNA Expression Array杂交实验 | 第33-35页 |
| ·结果 | 第35-38页 |
| ·Meg-01人巨核细胞系细胞NF-E2 mRNA的表达 | 第35页 |
| ·分析经MSCs-CM处理与未经MSCs-CM处理的Meg-01细胞差异表达的基因 | 第35-38页 |
| ·讨论 | 第38-41页 |
| 第三章 骨髓MGCs条件培养液联合TPO或IL-11对巨核系细胞体外生成的影响 | 第41-50页 |
| ·材料与方法 | 第41-44页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·方法 | 第42-44页 |
| ·骨髓MSCs条件培养液(MSCs-CM)的制备 | 第42页 |
| ·小鼠骨髓细胞悬液制备 | 第42页 |
| ·成熟巨核细胞体外液体培养 | 第42页 |
| ·成熟巨核细胞的乙酰胆碱脂酶(AchE)染色 | 第42-43页 |
| ·巨核祖细胞的体外扩增 | 第43页 |
| ·CFU-MK的培养 | 第43页 |
| ·统计学分析 | 第43-44页 |
| ·结果 | 第44-48页 |
| ·成熟巨核细胞形态 | 第44-45页 |
| ·MSCs-CM对成熟巨核细胞生成数的剂量反应关系 | 第45-46页 |
| ·MSCs-CM联合TPO或IL-11对成熟巨核细胞生成的影响 | 第46-47页 |
| ·MSCs-CM联合TPO或IL-11对巨核系祖细胞生成的影响 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 获取携带TPO基因的重组腺相关病毒载体 | 第50-75页 |
| ·材料与方法 | 第50-61页 |
| ·材料 | 第50-52页 |
| ·方法 | 第52-61页 |
| ·人胎肝总RNA的抽提 | 第52页 |
| ·PCR引物设计与合成 | 第52-54页 |
| ·RT-PCR扩增TPO基因 | 第54页 |
| ·DNA片段回收 | 第54-55页 |
| ·DNA重组连接反应 | 第55页 |
| ·感受态细胞的制备及转化 | 第55-56页 |
| ·重组克隆筛选和鉴定 | 第56页 |
| ·质粒小量提取 | 第56-57页 |
| ·质粒大量提取 | 第57页 |
| ·序列分析 | 第57页 |
| ·HEK293细胞培养 | 第57-58页 |
| ·磷酸钙转染HEK293细胞 | 第58页 |
| ·回收rAAV | 第58页 |
| ·病毒纯度的检测 | 第58-59页 |
| ·病毒物理滴度的检测 | 第59-60页 |
| ·rAAV-TPO转染HEK293细胞 | 第60-61页 |
| ·结果 | 第61-72页 |
| ·pAAV-TPO重组质粒的构建 | 第61-67页 |
| ·胎肝总RNA | 第61-62页 |
| ·RT-PCR扩增TPO基因 | 第62-63页 |
| ·构建pAAV-TPO | 第63-65页 |
| ·pAAV-TPO质粒测序鉴定 | 第65-67页 |
| ·病毒的包装与纯化 | 第67-72页 |
| ·rAAV-TPO病毒的包装 | 第67-69页 |
| ·rAAV-TPO病毒蛋白电泳结果 | 第69-70页 |
| ·斑点杂交测定rAAV-TPO的物理滴度 | 第70页 |
| ·用不同物理滴度的rAAV-TPO转染HEK293细胞 | 第70-72页 |
| ·讨论 | 第72-75页 |
| ·以TPO作为目的基因用于基因治疗 | 第72页 |
| ·以腺相关病毒载体作为基因治疗载体 | 第72-75页 |
| 第五章 rAAV介导TPO基因修饰的MSCs对巨核系细胞体外生成的影响 | 第75-88页 |
| ·材料与方法 | 第75-80页 |
| ·材料 | 第75-76页 |
| ·方法 | 第76-80页 |
| ·人骨髓MSCs的分离和体外培养 | 第76页 |
| ·rAAV-TPO转染人骨髓MSCs | 第76-77页 |
| ·TPO基因修饰的MSCs条件培养液(TPO/MSCs-CM)的制备 | 第77页 |
| ·人骨髓巨核细胞液体培养体系 | 第77页 |
| ·CFU-MK的培养 | 第77页 |
| ·RT-PCR检测骨髓MSCs和TPO基因转染MSCs的TPO表达 | 第77-78页 |
| ·细胞蛋白质制备 | 第78页 |
| ·BCA测蛋白浓度 | 第78页 |
| ·Western Blot检测骨髓MSCs和TPO基因转染MSCs的TPO表达 | 第78-79页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第79页 |
| ·统计学分析 | 第79-80页 |
| ·结果 | 第80-86页 |
| ·RT-PCR方法检测TPO mRNA的表达 | 第80页 |
| ·Western blot检测TPO蛋白质的表达 | 第80-81页 |
| ·转染的MSCs中GFP的表达 | 第81-83页 |
| ·TPO基因修饰的MSCs的条件培养液(TPO/MSCs-CM)对人巨核系细胞生成的作用 | 第83-86页 |
| ·TPO/MSCs-CM对液体培养体系中人巨核细胞生成的影响 | 第83-84页 |
| ·TPO/MSCs-CM对巨核祖细胞生成的影响 | 第84-86页 |
| ·讨论 | 第86-88页 |
| 第六章 共移植TPO基因修饰的MSCs对NOD/SCID小鼠巨核系造血生成的作用 | 第88-104页 |
| ·材料与方法 | 第88-92页 |
| ·材料 | 第88-89页 |
| ·方法 | 第89-92页 |
| ·分离人骨髓单个核细胞 | 第89页 |
| ·人骨髓MSCs的分离和体外培养 | 第89页 |
| ·rAAV-TPO转染人骨髓MSCs | 第89-90页 |
| ·细胞移植 | 第90页 |
| ·移植后检测 | 第90-92页 |
| ·动物观察 | 第90页 |
| ·移植后小鼠外周血血小板数检测 | 第90页 |
| ·流式细胞仪分析检测人源细胞含量 | 第90-91页 |
| ·提取基因组DNA,用PCR法检测人特异的Alu序列基因 | 第91页 |
| ·CFU-MK的培养 | 第91-92页 |
| ·组织学观察 | 第92页 |
| ·统计学分析 | 第92页 |
| ·结果 | 第92-102页 |
| ·经照射小鼠共移植后一般状况观察 | 第92页 |
| ·经照射小鼠共移植后外周血血小板数的变化 | 第92-96页 |
| ·经照射小鼠共移植后的组织学观察 | 第96-98页 |
| ·经照射小鼠共移植后CFU-MK的生成 | 第98-99页 |
| ·经照射小鼠共移植后外周血、骨髓中人源CD45细胞含量 | 第99-100页 |
| ·经照射小鼠共移植后骨髓人源CD45细胞中巨核系细胞的含量 | 第100-101页 |
| ·经照射小鼠共移植后骨髓、外周血、肝脏、脾脏中人特异的Alu序列的表达 | 第101-102页 |
| ·讨论 | 第102-104页 |
| 结论 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-120页 |
| 综述 | 第120-139页 |
| 致谢 | 第139-141页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第141-142页 |
