| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 综述与导言 | 第10-24页 |
| ·莽草酸概述 | 第10-13页 |
| ·莽草酸的性质 | 第10页 |
| ·莽草酸的作用以及其市场应用情况 | 第10-11页 |
| ·目前常用的莽草酸合成、提取方法 | 第11-13页 |
| ·大肠杆菌莽草酸代谢途径 | 第13-15页 |
| ·大肠杆菌莽草酸代谢途径相关基因 | 第15-16页 |
| ·莽草酸激酶的编码基因 | 第15-16页 |
| ·DHQ合成酶的编码基因 | 第16页 |
| ·温敏灭活质粒灭活方法原理 | 第16-17页 |
| ·蛋白质的分子进化技术 | 第17-22页 |
| ·化学诱变法 | 第18页 |
| ·易错PCR(error-prone PCR) | 第18页 |
| ·DNA改组技术(DNA shuffing) | 第18-20页 |
| ·非同源DNA改组技术 | 第20-22页 |
| ·延伸诱变法 | 第22页 |
| ·课题研究背景及工作目标 | 第22-24页 |
| ·研究背景 | 第22-23页 |
| ·作目标 | 第23-24页 |
| 第2章 材料与方法 | 第24-35页 |
| ·材料与仪器 | 第24-29页 |
| ·化学药品与生物试剂 | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌培养基 | 第25页 |
| ·缓冲液 | 第25-27页 |
| ·菌种 | 第27页 |
| ·载体质粒 | 第27页 |
| ·重组质粒 | 第27-28页 |
| ·实验仪器与设备 | 第28-29页 |
| ·微生物学方法 | 第29页 |
| ·细菌培养条件 | 第29页 |
| ·菌种的保藏 | 第29页 |
| ·遗传学方法 | 第29-31页 |
| ·三天用大肠杆菌钙转感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌的转化(钙转) | 第30页 |
| ·Red重组功能的诱导和大肠杆菌电转感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·大肠杆菌的转化(电转) | 第30-31页 |
| ·利用温敏质粒敲除大肠杆菌染色体上的目的基因 | 第31页 |
| ·分子生物学方法 | 第31-34页 |
| ·大肠杆菌中质粒DNA的抽提(沸水浴法) | 第31页 |
| ·DNA的酶切 | 第31-32页 |
| ·DNA的连接 | 第32页 |
| ·DNA的沉淀 | 第32页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶回收(Kit) | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌中质粒DNA的抽提(Kit) | 第33页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第33-34页 |
| ·莽草酸的检测 | 第34页 |
| ·实验过程中使用的生物学软件 | 第34-35页 |
| 第3章 结果与分析 | 第35-70页 |
| ·莽草酸检测的稳定性实验及摇瓶培养优化 | 第35-40页 |
| ·高碘酸显色法测定莽草酸稳定性的检验 | 第35页 |
| ·莽草酸标准曲线的绘制 | 第35-36页 |
| ·培养环境的检验 | 第36-37页 |
| ·诱导剂量的优化 | 第37-38页 |
| ·诱导时间的优化 | 第38-40页 |
| ·实验室前期构建的莽草酸生产菌株的产量测定 | 第40-41页 |
| ·莽草酸对大肠杆菌生长抑制的初步研究 | 第41-45页 |
| ·第一次抑菌实验 | 第41-42页 |
| ·第二次抑菌实验 | 第42页 |
| ·第三次抑菌实验 | 第42-43页 |
| ·液体抑菌实验 | 第43-45页 |
| ·aroB基因的强化表达 | 第45-50页 |
| ·aroB基因的克隆 | 第45-46页 |
| ·表达质粒pTrc-aroB的构建 | 第46-49页 |
| ·SDS-PAGE检测aroB基因的表达 | 第49页 |
| ·aroB强化表达菌株的莽草酸产量的测定 | 第49-50页 |
| ·aroK基因的敲除研究 | 第50-70页 |
| ·灭活质粒pMAK-aroK(f)(b)的鉴定 | 第51页 |
| ·大肠杆菌染色体上aroK基因的敲除 | 第51-54页 |
| ·回补aroK进行大肠杆菌染色体上aroK基因的敲除 | 第54-57页 |
| ·通过移码突变进行大肠杆菌染色体上aroK基因的敲除 | 第57-64页 |
| ·培养基中加入莽草酸后进行大肠杆菌染色体上aroK基因的敲除 | 第64-70页 |
| 第4章 讨论 | 第70-76页 |
| ·关于莽草酸对于大肠杆菌抑菌作用问题的展望 | 第70-71页 |
| ·紫外诱变 | 第70页 |
| ·采取全转录系统的改变 | 第70-71页 |
| ·多基因组工程改变细胞形状 | 第71页 |
| ·关于温敏质粒pMAK-705进行基因敲除过程中需要注意问题 | 第71-73页 |
| ·一次重组转化时温度控制的研究 | 第72页 |
| ·获得二次重组子的操作研究 | 第72-73页 |
| ·对于整个灭活过程进行缩减的研究 | 第73页 |
| ·关于aroK基因敲除问题的进一步研究展望 | 第73-74页 |
| ·多种移码突变的研究 | 第73-74页 |
| ·aroB基因回补后进行aroK基因敲除实验 | 第74页 |
| ·关于构建不需添加芳香族物质进行生产的工程菌的构想 | 第74-75页 |
| ·课题前景展望 | 第75-76页 |
| 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 附录 | 第81-83页 |
