| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-36页 |
| 1 α-半乳糖苷酶的研究进展 | 第16-25页 |
| ·α-半乳糖苷酶的来源 | 第16-18页 |
| ·α-半乳糖苷酶的酶学特性 | 第18-20页 |
| ·α-半乳糖苷酶的分类 | 第20-22页 |
| ·α-半乳糖苷酶的分子特性 | 第22-25页 |
| 2 α-半乳糖苷酶的应用 | 第25-29页 |
| ·α-半乳糖苷酶与豆粕饲料 | 第25-27页 |
| ·α-半乳糖苷酶与食品工业 | 第27页 |
| ·α-半乳糖苷酶与医疗 | 第27-28页 |
| ·α-半乳糖苷酶与其他工业 | 第28-29页 |
| 3 α-半乳糖苷酶基因工程的研究 | 第29页 |
| 4 基因克隆技术的研究进展 | 第29-31页 |
| ·构建基因组文库 | 第29-30页 |
| ·Tail-PCR技术 | 第30-31页 |
| ·3′RACE 和5′RACE (rapid amplificationof cDNA ends) | 第31页 |
| ·简并PCR (Degenerate PCR) | 第31页 |
| 5 大肠杆菌表达系统的研究进展 | 第31-35页 |
| ·表达载体 | 第32页 |
| ·宿主细胞 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌中外源蛋白的高效表达策略 | 第33-35页 |
| 6 研究的目的和意义 | 第35-36页 |
| 第二章 来源于根霉(Rhizopus sp. F78) α-半乳糖苷酶基因的克隆、表达和酶学性质 | 第36-67页 |
| 1. 实验材料 | 第36-37页 |
| ·菌株与质粒 | 第36页 |
| ·引物合成 | 第36页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第36页 |
| ·仪器 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36-37页 |
| ·常用溶液 | 第37页 |
| 2. 实验方法 | 第37-55页 |
| ·根霉F78 产酶能力的验证 | 第37页 |
| ·根霉F78 菌种鉴定 | 第37-38页 |
| ·来源于根霉F78 的α-半乳糖苷酶基因aga-F78 的克隆 | 第38-45页 |
| ·原核表达载体 pET-22b(+)lic/aga-F78-H 的构建 | 第45-47页 |
| ·重组酶Aga-F78-H与原酶Aga-F78 分离纯化与性质研究 | 第47-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-65页 |
| ·菌株F78 产酶能力的验证 | 第55页 |
| ·产α-半乳糖苷酶菌株F78 的鉴定 | 第55页 |
| ·α-半乳糖苷酶基因 aga-F78 的克隆、表达 | 第55-58页 |
| ·重组酶Aga-F78-H与原酶Aga-F78 的纯化及蛋白性质 | 第58-60页 |
| ·重组酶Aga-F78-H与原酶Aga-F78 酶学性质研究 | 第60-65页 |
| 4 讨论 | 第65-66页 |
| ·重组酶Aga-F78-H的克隆、表达 | 第65-66页 |
| ·重组酶 Aga-F78-H与原酶 Aga-F78 的性质比较分析 | 第66页 |
| 本章小结 | 第66-67页 |
| 第三章 来源于赤霉(Gibberela sp. F75) α-半乳糖苷酶基因的克隆、表达和酶学性质 | 第67-82页 |
| 1 实验材料 | 第67页 |
| ·菌株与质粒 | 第67页 |
| ·引物合成 | 第67页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第67页 |
| ·仪器 | 第67页 |
| ·培养基 | 第67页 |
| ·常用溶液 | 第67页 |
| 2 实验方法 | 第67-72页 |
| ·赤霉F75 产酶能力的验证 | 第67-68页 |
| ·赤霉F75 的菌种鉴定 | 第68页 |
| ·α-半乳糖苷酶基因aga-F75 的克隆 | 第68-70页 |
| ·原核表达载体 pET-22b(+)/aga-F75-H 的构建 | 第70-71页 |
| ·重组酶Aga-F75-H的纯化 | 第71页 |
| ·重组酶Aga-F75-H酶学性质测定 | 第71-72页 |
| ·重组酶Aga-F75-H比活性测定 | 第72页 |
| ·重组酶Aga-F75-H底物特异性的测定 | 第72页 |
| ·重组酶Aga-F75-H对豆粕降解能力的研究 | 第72页 |
| 3 结果与分析 | 第72-79页 |
| ·产α-半乳糖苷酶的菌株F75 的分子鉴定 | 第72-73页 |
| ·赤霉F75 产酶能力的验证 | 第73页 |
| ·α-半乳糖苷酶基因aga-F75 的克隆 | 第73-75页 |
| ·原核表达载体 pET-22b(+)/aga-F75-H 的构建 | 第75页 |
| ·重组酶Aga-F75-H的诱导表达与纯化 | 第75-76页 |
| ·重组酶Aga-F75-H 酶学性质测定 | 第76-79页 |
| ·Aga-F75-H底物特异性的测定 | 第79页 |
| ·重组酶Aga-F75-H对豆粕降解能力的研究 | 第79页 |
| 4 讨论 | 第79-80页 |
| 本章小节 | 第80-82页 |
| 第四章 来源于链霉菌S9 (Streptomyces sp. S9) α-半乳糖苷酶基因的克隆、表达和酶学性质 | 第82-97页 |
| 1 实验材料 | 第82-83页 |
| ·菌株与质粒 | 第82页 |
| ·引物合成 | 第82页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第82页 |
| ·仪器 | 第82页 |
| ·培养基 | 第82-83页 |
| ·常用溶液 | 第83页 |
| 2 实验方法 | 第83-88页 |
| ·链霉菌S9 产酶能力的验证 | 第83页 |
| ·α-半乳糖苷酶基因aga-S9 的克隆 | 第83-86页 |
| ·原核表达载体pET-28a(+)/aga-S9-H 的构建 | 第86-87页 |
| ·重组酶Aga-S9-H的纯化 | 第87页 |
| ·重组酶Aga-S9-H 酶学性质测定 | 第87-88页 |
| ·重组酶Aga-S9-H比活性测定 | 第88页 |
| ·重组酶Aga-S9-H底物特异性的测定 | 第88页 |
| ·重组酶Aga-S9-H对豆粕降解能力的研究 | 第88页 |
| 3 结果与分析 | 第88-95页 |
| ·链霉菌S9 产酶能力的验证 | 第88页 |
| ·α-半乳糖苷酶基因aga-S9 的克隆 | 第88-91页 |
| ·原核表达载体pET-28a(+)/aga-S9-H的构建 | 第91页 |
| ·重组酶Aga-S9-H的诱导表达与纯化 | 第91-92页 |
| ·重组酶Aga-S9-H 酶学性质测定 | 第92-95页 |
| ·重组酶Aga-S9 底物特异性的测定 | 第95页 |
| ·重组酶Aga-S9-H对豆粕降解能力的研究 | 第95页 |
| 4 讨论 | 第95-96页 |
| 本章小节 | 第96-97页 |
| 第五章 来源于链霉菌S27 (Streptomyces sp. S27) α-半乳糖苷酶基因的克隆、表达和酶学性质 | 第97-111页 |
| 1 实验材料 | 第97-98页 |
| ·菌株与质粒 | 第97页 |
| ·引物合成 | 第97页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第97页 |
| ·仪器 | 第97页 |
| ·培养基 | 第97页 |
| ·常用溶液 | 第97-98页 |
| 2 实验方法 | 第98-101页 |
| ·链霉菌S27 产酶能力的验证 | 第98页 |
| ·α-半乳糖苷酶基因aga-S27 的克隆 | 第98-99页 |
| ·原核表达载体pET-28a(+)/aga-S27-H 的构建 | 第99-100页 |
| ·重组酶Aga-S27-H的纯化 | 第100页 |
| ·重组酶Aga-S27-H 酶学性质测定 | 第100-101页 |
| ·重组酶Aga-S27-H比活性测定 | 第101页 |
| ·重组酶Aga-S27-H底物特异性的测定 | 第101页 |
| ·重组酶Aga-S27-H对豆粕降解能力的研究 | 第101页 |
| 3 结果与分析 | 第101-108页 |
| ·链霉菌S27 产酶能力的验证 | 第101页 |
| ·α-半乳糖苷酶基因aga-S27 的克隆 | 第101-104页 |
| ·原核表达载体pET-28a(+)/aga-S27-H的构建 | 第104-105页 |
| ·重组酶Aga-S27-H的诱导表达与纯化 | 第105-106页 |
| ·重组酶Aga-S27-H 酶学性质测定 | 第106-108页 |
| ·Aga-S27-H底物特异性的测定 | 第108页 |
| ·重组酶Aga-S27-H对豆粕降解能力的研究 | 第108页 |
| 4 讨论 | 第108-109页 |
| 本章小节 | 第109-111页 |
| 第六章 来源于鼠疫耶尔森氏菌91001 (Yersinia pestis biovar Microtus str. 91001) α-半乳糖苷酶的基因克隆、表达和酶学性质 | 第111-123页 |
| 1 实验材料 | 第111-112页 |
| ·菌株与质粒 | 第111页 |
| ·引物合成 | 第111页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第111页 |
| ·仪器 | 第111页 |
| ·培养基 | 第111页 |
| ·常用溶液 | 第111-112页 |
| 2 实验方法 | 第112-115页 |
| ·α-半乳糖苷酶基因aga-Y的克隆 | 第112页 |
| ·原核表达载体 pET-22b(+)/aga-Y-H 的构建 | 第112-114页 |
| ·重组酶Aga-Y-H的纯化 | 第114页 |
| ·重组酶Aga-Y-H酶学性质测定 | 第114页 |
| ·重组酶Aga-Y-H比活性测定 | 第114页 |
| ·重组酶Aga-Y-H底物特异性的测定 | 第114-115页 |
| ·重组酶Aga-Y-H对豆粕降解能力的研究 | 第115页 |
| 3 结果与分析 | 第115-121页 |
| ·α-半乳糖苷酶基因aga-Y的克隆 | 第115-117页 |
| ·原核表达载体 pET-22b(+)/aga-Y-H 的构建 | 第117页 |
| ·重组酶Aga-Y-H的诱导表达与纯化 | 第117-118页 |
| ·重组酶Aga-Y-H 酶学性质测定 | 第118-121页 |
| ·Aga-Y-H底物特异性的测定 | 第121页 |
| ·重组酶Aga-Y-H对豆粕降解能力的研究 | 第121页 |
| 4 讨论 | 第121-122页 |
| 本章小节 | 第122-123页 |
| 第七章 讨论 | 第123-132页 |
| 1 菌株及其诱导培养基的选择 | 第123-124页 |
| ·诱导培养基的选择及诱导条件的探索 | 第123页 |
| ·菌株的选择 | 第123-124页 |
| 2. 微生物36 家族α-半乳糖苷酶的分析及简并引物的设计与应用 | 第124-126页 |
| 3 α-半乳糖苷酶的异源表达研究 | 第126-127页 |
| ·表达载体的选择 | 第126-127页 |
| ·α-半乳糖苷酶在大肠杆菌中的表达位置 | 第127页 |
| ·α-半乳糖苷酶在大肠杆菌中的表达条件 | 第127页 |
| 4 五个微生物来源36 家族α-半乳糖苷酶重组酶性质特点 | 第127-130页 |
| ·分子特性及酶学性质的比较 | 第127-129页 |
| ·动力学 | 第129-130页 |
| 5 五个微生物来源36 家族α-半乳糖苷酶降解能力的研究 | 第130-132页 |
| ·天然底物降解试验 | 第130页 |
| ·豆粕降解实验 | 第130-132页 |
| 第八章 结论 | 第132-133页 |
| 参考文献 | 第133-145页 |
| 致谢 | 第145-146页 |
| 作者简历 | 第146页 |
