柑桔溃疡病菌重组单链抗体的高效表达及稳定性改造
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 1 绪论 | 第12-26页 |
| ·抗体简介 | 第12-16页 |
| ·抗体的基本结构 | 第12-13页 |
| ·单链抗体基因的构建 | 第13页 |
| ·单链抗体的表达及复性 | 第13-15页 |
| ·抗体的纯化 | 第15-16页 |
| ·单链抗体的稳定性 | 第16页 |
| ·柑橘溃疡病菌简介 | 第16-22页 |
| ·柑桔溃疡病的发生与危害 | 第16-18页 |
| ·柑桔溃疡病菌的基因组研究 | 第18-19页 |
| ·柑桔溃疡病菌的检疫检验技术 | 第19-21页 |
| ·病害根除计划与检疫除害 | 第21-22页 |
| ·研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| ·研究的目标和内容 | 第23-24页 |
| ·整体设计思路 | 第24页 |
| ·创新之处 | 第24-26页 |
| 2 SCFV 克隆、表达及纯化 | 第26-38页 |
| ·技术路线 | 第26页 |
| ·实验材料 | 第26-29页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·主要试剂 | 第27-29页 |
| ·实验方法 | 第29-32页 |
| ·筛选后单链抗体库DNA 的扩增 | 第29页 |
| ·ScFv 基因的克隆 | 第29-31页 |
| ·单链抗体ScFv 表达 | 第31-32页 |
| ·XAC-ScFv 表达产物的纯化 | 第32页 |
| ·表达产物的检测 | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-35页 |
| ·阳性克隆子验证 | 第32-33页 |
| ·SDS-PAGE 检测表达与纯化结果 | 第33-34页 |
| ·Western blot | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-38页 |
| ·单链抗体的表达 | 第35-36页 |
| ·单链抗体的纯化与鉴定 | 第36-38页 |
| 3 重组单链抗体的复性及活性测定 | 第38-45页 |
| ·技术路线 | 第38页 |
| ·实验材料 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-41页 |
| ·凝胶柱层析复性 | 第39页 |
| ·斑点杂交测定单链抗体活性 | 第39页 |
| ·Biacore 分析单链抗体亲和力 | 第39-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-43页 |
| ·分子筛层析复性的抗体 | 第41页 |
| ·斑点杂交测定抗体活性 | 第41-42页 |
| ·Biacore 测定抗体亲和力 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| ·单链抗体的复性 | 第43页 |
| ·斑点杂交测定抗体活性 | 第43-44页 |
| ·Biacore 亲和力测定 | 第44-45页 |
| 4 稳定型重组单链抗体构建 | 第45-52页 |
| ·技术路线 | 第45页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-48页 |
| ·VH 和VL 引入半胱氨酸位点 | 第45-47页 |
| ·VH 和VL 基因的克隆 | 第47-48页 |
| ·结果与分析 | 第48-49页 |
| ·VH 和VL 基因的验证 | 第48-49页 |
| ·阳性克隆子验证 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-52页 |
| ·半胱氨酸位点的引入 | 第49-50页 |
| ·稳定型重组抗体的构建表达 | 第50-52页 |
| 5 主要研究结论及后续研究建议 | 第52-53页 |
| ·主要研究结论 | 第52页 |
| ·后续工作建议 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 附录 | 第60-62页 |
