甘蔗叶片cDNA文库构建及SPS前体mRNA选择性剪接初步研究
| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第4-9页 |
| 第1章 绪论 | 第9-25页 |
| ·前言 | 第9页 |
| ·文献综述 | 第9-22页 |
| ·构建全长cDNA文库的方法比较及其应用 | 第9-16页 |
| ·前体mRNA选择性剪接分子机制研究进展 | 第16-22页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第22-25页 |
| 第2章 甘蔗叶片cDNA文库的构建及基因克隆 | 第25-55页 |
| ·材料与试剂 | 第25页 |
| ·植物材料与菌株 | 第25页 |
| ·主要试剂和酶 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-35页 |
| ·总RNA提取 | 第25-27页 |
| ·RNA质量检测 | 第27-28页 |
| ·mRNA的分离 | 第28-29页 |
| ·cDNA文库构建 | 第29-33页 |
| ·基因克隆及生物信息学分析 | 第33-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-52页 |
| ·甘蔗总RNA的提取 | 第35-36页 |
| ·mRNA的分离 | 第36页 |
| ·双链cDNA的合成 | 第36-37页 |
| ·双链cDNA与载体的连接效率分析 | 第37页 |
| ·转化 E.coli DH 5α转化效率分析 | 第37-38页 |
| ·测定未扩增文库库容和重组克隆百分比 | 第38页 |
| ·cDNA文库插入片段长度的PCR检测 | 第38-39页 |
| ·基因克隆及生物信息学分析讨论 | 第39-52页 |
| ·讨论 | 第52-55页 |
| ·LD-PCR在cDNA文库构建中的应用 | 第52页 |
| ·双链cDNA的纯化回收 | 第52-53页 |
| ·T载体在cDNA文库构建中的应用 | 第53-54页 |
| ·减少cDNA文库构建中间步骤的作用 | 第54-55页 |
| 第3章 SPS前体mRNA剪接体的克隆和序列分析 | 第55-71页 |
| ·实验材料 | 第55页 |
| ·材料与菌株 | 第55页 |
| ·主要试剂和酶 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-57页 |
| ·核酸提取 | 第55-56页 |
| ·PCR引物的设计与合成 | 第56页 |
| ·PCR反应及其产物回收 | 第56页 |
| ·回收产物的连接和转化 | 第56页 |
| ·重组质粒的提取和PCR检测酶切鉴定 | 第56页 |
| ·测序及序列分析 | 第56页 |
| ·RT-PCR检测SPS选择性剪接体 | 第56-57页 |
| ·结果与讨论 | 第57-71页 |
| ·核酸的提取 | 第57页 |
| ·SPS的cDNA片段克隆 | 第57-58页 |
| ·重组质粒的提取和PCR检测、酶切鉴定 | 第58页 |
| ·测序及序列分析 | 第58-65页 |
| ·RT-PCR检测SPS的选择性剪接 | 第65-67页 |
| ·SPS不同剪接体的序列分析 | 第67-68页 |
| ·SPS出现不同形式剪接体的可能分子机制讨论 | 第68-71页 |
| 结论 | 第71-73页 |
| 附录1 符号缩略表 | 第73-74页 |
| 附录2 溶液配方 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 个人简历 | 第85-86页 |
