| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 1 引言 | 第11-29页 |
| ·防御素的研究进展 | 第11-19页 |
| ·防御素的分类、分布和结构 | 第11-13页 |
| ·防御素的基因定位及进化 | 第13-14页 |
| ·防御素的生物学功能及作用机制 | 第14-15页 |
| ·防御素的表达分类及调控 | 第15-16页 |
| ·β-防御素 | 第16-19页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的研究进展 | 第19-26页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的生物学和遗传性特点 | 第20页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的构成 | 第20-22页 |
| ·巴斯德毕赤酵母高效表达外源基因的机制 | 第22-23页 |
| ·巴氏毕赤酵母表达外源蛋白的优点 | 第23页 |
| ·影响外源蛋白表达水平的因素 | 第23-26页 |
| ·本研究的目的、意义、主要内容 | 第26-29页 |
| ·研究的目的及意义 | 第26-27页 |
| ·研究的主要内容 | 第27-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-39页 |
| ·试验材料 | 第29-30页 |
| ·菌株与质粒 | 第29页 |
| ·酶及生化试剂 | 第29页 |
| ·培养基及有关的溶液配制 | 第29-30页 |
| ·主要设备 | 第30页 |
| ·试验方法 | 第30-34页 |
| ·序列的设计 | 第30页 |
| ·表达载体构建流程 | 第30-31页 |
| ·pBD-2成熟蛋白基因表达片段序列的设计合成 | 第31-32页 |
| ·目的基因片段和载体的酶切回收 | 第32页 |
| ·大肠杆菌DH 5α感受肽细胞的制备 | 第32-33页 |
| ·pBD-2与pPIC9K载体的连接转化 | 第33页 |
| ·携带pPIC9K/pBD-2质粒的阳性克隆的筛选 | 第33页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·重组pPIC9K/pBD-2质粒的鉴定 | 第34页 |
| ·毕赤酵母细胞的转化 | 第34-39页 |
| ·转化DNA样品的制备 | 第34-35页 |
| ·毕赤酵母GS115电转化 | 第35页 |
| ·甲醇利用表型的确定 | 第35-36页 |
| ·多拷贝转化子的筛选 | 第36页 |
| ·重组酵母的PCR鉴定 | 第36-37页 |
| ·pBD-2基因在毕赤酵母中的表达 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的制备及发酵上清液的蛋白电泳鉴定 | 第37-38页 |
| ·pBD-2的抗菌活性鉴定 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-45页 |
| ·目的序列的设计合成及分析 | 第39页 |
| ·重组pPIC9K/pBD-2质粒的阳性克隆的筛选及酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组pPIC9K/pBD-2 DNA质粒图谱的绘制 | 第40页 |
| ·pBD-2基因在毕赤酵母中的表达及表达产物分析 | 第40-45页 |
| ·质粒pPIC9K/pBD-2和pPIC9K转化 | 第41页 |
| ·重组酵母甲醇利用表型的确定 | 第41-42页 |
| ·多拷贝转化子的筛选 | 第42页 |
| ·重组酵母的PCR鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组酵母的蛋白表达与SDS-PAGE分析 | 第43-44页 |
| ·生物活性检测 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-49页 |
| ·pBD-2目的基因序列的设计 | 第46页 |
| ·载体pPIC9K/pBD-2的构建 | 第46-47页 |
| ·毕赤酵母表达 | 第47-49页 |
| 5 结论 | 第49-50页 |
| 6 参考文献 | 第50-55页 |
| 附录a:酵母偏爱密码子 | 第55-56页 |
| 附录b:测序结果 | 第56-57页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
