| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-28页 |
| 1 苹果茎沟病毒(ASGV)的研究概况 | 第13-20页 |
| ·ASGV的生物学特性 | 第13-14页 |
| ·寄主范围 | 第13页 |
| ·症状 | 第13-14页 |
| ·传播途径 | 第14页 |
| ·ASGV病毒特性及基因组结构特征 | 第14-15页 |
| ·病毒特性 | 第14-15页 |
| ·ASGV的基因组结构特征 | 第15页 |
| ·植物抗病毒基因工程 | 第15-20页 |
| ·培育和栽培无病毒苗木 | 第16页 |
| ·抗病毒基因工程的研究进展 | 第16-20页 |
| ·CP基因介导的抗病性研究 | 第17-18页 |
| ·MP基因介导的抗性研究 | 第18-19页 |
| ·复制酶基因介导的抗性研究 | 第19页 |
| ·反义RNA技术 | 第19-20页 |
| 2 RNAi的研究概况 | 第20-27页 |
| ·RNAi的发现 | 第20-21页 |
| ·RNAi技术的机制 | 第21-23页 |
| ·RNAi技术的特点 | 第23-24页 |
| ·RNAi技术在植物基因工程中的应用 | 第24-27页 |
| ·植物中RNAi诱导方法 | 第24-25页 |
| ·RNAi在植物基因工程中的应用 | 第25-27页 |
| 3 目的及意义 | 第27-28页 |
| 第二章 苹果茎沟病毒CP基因hairpin RNA表达载体的构建 | 第28-42页 |
| ·材料和方法 | 第28-35页 |
| ·供试材料 | 第28-29页 |
| ·材料来源 | 第28页 |
| ·菌种、质粒、主要试剂 | 第28-29页 |
| ·hpRNA植物表达载体的构建策略 | 第29-30页 |
| ·目标短片段的获得 | 第30-32页 |
| ·引物的设计 | 第30页 |
| ·目标片段的PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·DNA片段的回收 | 第31-32页 |
| ·目标片段与载体的连接 | 第32页 |
| ·连接产物转化宿主菌 | 第32-33页 |
| ·DH10B感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| ·电击转化大肠杆菌DH10B感受态细胞 | 第33页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第34页 |
| ·PCR鉴定 | 第34页 |
| ·酶切鉴定 | 第34页 |
| ·克隆片段hpRNA表达载体的构建 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-42页 |
| ·片段5'seg392的hpRNAi植物表达载体的构建 | 第35-39页 |
| ·目标片段5'seg392的PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·目标片段5'seg392的TA克隆质粒的鉴定 | 第36-37页 |
| ·5'seg392正向与反向重组植物表达载体的获得与鉴定 | 第37页 |
| ·5'seg392 hpRNA表达载体的获得与鉴定 | 第37-39页 |
| ·3'seg209的正向和反向重组植物表达载体的构建 | 第39-42页 |
| ·目标片段3'seg209的PCR扩增 | 第39-40页 |
| ·目标片段3'seg209的TA克隆质粒的鉴定 | 第40页 |
| ·3'seg209正向重组载体的获得与鉴定 | 第40-41页 |
| ·3'seg209反向重组载体的获得与鉴定 | 第41-42页 |
| 第三章 苹果茎沟病毒CP基因目标片段的重组植物表达载体转化烟草研究 | 第42-50页 |
| ·材料和方法 | 第42-44页 |
| ·主要试剂和供试材料 | 第42页 |
| ·研究方法 | 第42-44页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·重组植物表达载体转化根癌农杆菌感受态细胞 | 第42-43页 |
| ·烟草的转化、再生 | 第43-44页 |
| ·Hyg抗性植株的筛选及PCR检测 | 第44页 |
| ·结果和分析 | 第44-47页 |
| ·重组载体转化烟草后叶盘的生长、分化情况 | 第44-45页 |
| ·转基因烟草植株的获得 | 第45-46页 |
| ·转基因烟草植株的PCR检测 | 第46-47页 |
| ·结论与讨论 | 第47-50页 |
| ·小结 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-50页 |
| 附录 试验常用溶液配方 | 第50-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
