| 目录 | 第1-9页 |
| 图表目录 | 第9-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 缩写词(Abbreviation) | 第14-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-26页 |
| ·黄瓜花叶病毒研究进展 | 第15-20页 |
| ·黄瓜花叶病毒的生物学特性及基因组结构 | 第15-16页 |
| ·黄瓜花叶病毒株系划分 | 第16-18页 |
| ·黄瓜花叶病毒防治研究进展 | 第18-20页 |
| ·芜菁花叶病毒的分子生物学研究进展 | 第20-22页 |
| ·RNA干扰的机制及其应用 | 第22-26页 |
| ·RNAi的可能作用机制 | 第23-24页 |
| ·发卡RNA结构(hpRNA)与RNA沉默 | 第24-25页 |
| ·RNAi在抗病毒育种中的作用 | 第25-26页 |
| 2 黄瓜花叶病毒分离物多样性分析 | 第26-35页 |
| ·材料与方法 | 第26-30页 |
| ·CMV分离物 | 第26-27页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·病毒样品制备 | 第27页 |
| ·一步法RT-PCR扩增 | 第27页 |
| ·RT-PCR产物的回收 | 第27-28页 |
| ·RT-PCR产物的克隆 | 第28-29页 |
| ·CP基因片段与pMD18-T载体的连接 | 第28页 |
| ·CP基因片段转入pMD18-T载体 | 第28-29页 |
| ·白斑克隆的鉴定 | 第29页 |
| ·RT-PCR产物序列测定 | 第29页 |
| ·CMV CP基因序列同源性分析 | 第29-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-33页 |
| ·CMV分离物CP基因片段的RT-PCR扩增 | 第30页 |
| ·RT-PCR产物的克隆及测序 | 第30-32页 |
| ·CMV CP基因核苷酸序列同源性比较 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 3 含TuMV和CMV嵌合基因双链表达载体的构建 | 第35-49页 |
| ·材料和方法 | 第35-43页 |
| ·菌株和质粒 | 第35-36页 |
| ·嵌合基因片段TC1和TC2的制备 | 第36-39页 |
| ·嵌合基因TC1和TC2片段的连接方式、酶切位点及引物组合 | 第36页 |
| ·嵌合基因片段的引物设计 | 第36-37页 |
| ·PCR扩增嵌合基因目的片段 | 第37-38页 |
| ·嵌合基因目的片段PCR产物的纯化 | 第38页 |
| ·嵌合基因目的片段TC1、TC2的酶切及其纯化 | 第38-39页 |
| ·双元表达载体pBI121的制备 | 第39页 |
| ·中间表达载体pBI TC2的构建 | 第39-41页 |
| ·嵌合TC2基因片段与pBI121表达载体的连接 | 第40-41页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第41页 |
| ·转化菌落的PCR鉴定和酶切鉴定 | 第41页 |
| ·嵌合基因双链表达载体的构建 | 第41-43页 |
| ·构建策略 | 第41页 |
| ·嵌合TC1基因片段与中间表达载体的连接 | 第41-43页 |
| ·农杆菌的三亲融合法转化 | 第43页 |
| ·农杆菌中质粒的鉴定 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-48页 |
| ·嵌合基因目的片段的获得 | 第43-45页 |
| ·中间重组载体pBI TC2的构建 | 第45-46页 |
| ·中间重组载体pBI TC2的菌落PCR鉴定 | 第45页 |
| ·重组中间载体pBI TC2酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·含嵌合基因双链表达载体pBI TC3的构建 | 第46-48页 |
| ·重组表达载体pBI TC3的菌落PCR鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组表达载体pBI TC3的酶切鉴定 | 第47页 |
| ·农杆菌质粒PCR鉴定 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| 4 嵌合基因双链表达载体pBI TC3在植物体中的功能分析 | 第49-61页 |
| ·嵌合基因双链表达载体pBI TC3对拟南芥的转化 | 第49-54页 |
| ·材料与方法 | 第49-51页 |
| ·植物材料、菌株及抗生素 | 第49页 |
| ·Floral Dip法转化拟南芥植株 | 第49-50页 |
| ·转化植株的抗生素筛选 | 第50页 |
| ·拟南芥基因组DNA的提取 | 第50-51页 |
| ·拟南芥抗性转化植株T_1代的PCR鉴定 | 第51页 |
| ·转基因拟南芥T_2代植株的抗病性鉴定 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-54页 |
| ·抗性转基因植株的获得 | 第51-52页 |
| ·抗性转化植株的PCR分析 | 第52-53页 |
| ·转基因拟南芥T_2代植株的抗病性鉴定 | 第53-54页 |
| ·嵌合基因双链表达载体pBI TC3对"四九"菜心的转化 | 第54-61页 |
| ·材料与方法 | 第54-56页 |
| ·植物材料和菌株 | 第54页 |
| ·"四九"菜心无菌苗的制备 | 第54页 |
| ·"四九"菜心的遗传转化 | 第54-55页 |
| ·"四九"菜心基因组DNA的提取 | 第55页 |
| ·"四九"菜心抗性转化植株的PCR鉴定 | 第55-56页 |
| ·转基因"四九"菜心植株的抗病性鉴定 | 第56页 |
| ·结果与分析 | 第56-59页 |
| ·抗性转基因植株的获得 | 第56-58页 |
| ·抗性转化植株的PCR分析 | 第58-59页 |
| ·转基因"四九"菜心T_1代植株的抗病性鉴定 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 硕士研究生期间发表的论文 | 第69页 |
