| 目录 | 第1-9页 |
| 缩写词 | 第9-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-28页 |
| 1 农杆菌介导的单子叶植物基因转化的研究 | 第14-19页 |
| ·研究概况 | 第14-15页 |
| ·影响农杆菌介导的单子叶植物遗传转化的因素 | 第15-16页 |
| ·农杆菌本身的影响因素 | 第15页 |
| ·单子叶植物方面的影响因素 | 第15-16页 |
| ·提高农杆菌转化单子叶植物效率的方法 | 第16-18页 |
| ·促进vir基因的活化 | 第16-17页 |
| ·外植体的选择 | 第17页 |
| ·外植体的预培养 | 第17页 |
| ·外植体的农杆菌接种及共培养 | 第17页 |
| ·外植体的脱菌培养 | 第17-18页 |
| ·选择培养方法 | 第18页 |
| ·其他 | 第18页 |
| ·农杆菌介导ACS基因遗传转化的研究进展 | 第18-19页 |
| 2 蝴蝶兰生物技术研究概况 | 第19-24页 |
| ·蝴蝶兰离体培养研究概况 | 第19-22页 |
| ·种子萌发及影响因素 | 第20页 |
| ·原球茎的诱导、增殖及其影响因素 | 第20-21页 |
| ·生根与壮苗 | 第21-22页 |
| ·丛生芽的诱导 | 第22页 |
| ·原生质体分离与融合 | 第22页 |
| ·蝴蝶兰基因工程研究概况 | 第22-24页 |
| ·胚珠发育基因的表达及序列 | 第22-23页 |
| ·衰老基因工程的研究 | 第23页 |
| ·花色基因工程的研究 | 第23页 |
| ·遗传转化再生体系的选择 | 第23页 |
| ·选择标记基因及报告基因 | 第23-24页 |
| ·转基因研究 | 第24页 |
| 3 ACS(乙烯合成酶)基因克隆的研究 | 第24-27页 |
| ·ACS(乙烯合成酶)的功能 | 第24-25页 |
| ·ACS(乙烯合成酶)基因的特性 | 第25-26页 |
| ·多基因家族性 | 第25页 |
| ·序列的高度保守性 | 第25-26页 |
| ·基因表达具有时空特异性 | 第26页 |
| ·ACS基因克隆研究进展 | 第26-27页 |
| 4.本研究的内容与意义 | 第27-28页 |
| ·本研究的主要内容 | 第27页 |
| ·本研究的意义 | 第27-28页 |
| 第二章 蝴蝶兰再生系统的优化 | 第28-43页 |
| 1 材料与方法 | 第28-31页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-31页 |
| ·蝴蝶兰转基因受体系统的建立 | 第28-29页 |
| ·影响蝴蝶兰受体系统培养的因素 | 第29-30页 |
| ·蝴蝶兰受体系统抗生素敏感性试验 | 第30页 |
| ·蝴蝶兰原球茎的分化 | 第30页 |
| ·壮苗与生根 | 第30-31页 |
| ·试管苗的练苗与移栽 | 第31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-39页 |
| ·蝴蝶兰转基因受体系统的建立 | 第31-32页 |
| ·6-BA/NAA配比对细小原球茎诱导的影响 | 第31页 |
| ·天然附加物对细小原球茎诱导的影响 | 第31-32页 |
| ·不同因素对蝴蝶兰转基因受体系统培养的影响 | 第32-36页 |
| ·6-BA对受体系统培养的影响 | 第32-33页 |
| ·吸附剂对受体系统培养的影响 | 第33页 |
| ·培养方式对受体系统培养的影响 | 第33-34页 |
| ·接种处理方式对受体系统培养的影响 | 第34-35页 |
| ·光照强度及继代时间对受体系统培养的影响 | 第35-36页 |
| ·甘露醇对受体系统培养的影响 | 第36页 |
| ·蝴蝶兰受体系统抗生素敏感性试验 | 第36-38页 |
| ·头孢霉素对受体系统培养的影响 | 第36-37页 |
| ·卡那霉素对受体系统培养的影响 | 第37-38页 |
| ·蝴蝶兰原球茎的分化 | 第38页 |
| ·生根与壮苗 | 第38-39页 |
| ·试管苗的练苗与移栽 | 第39页 |
| 3 讨论 | 第39-43页 |
| ·蝴蝶兰遗传转化受体系统选择 | 第39-40页 |
| ·蝴蝶兰受体系统培养的关键因素 | 第40-41页 |
| ·蝴蝶兰组织培养中的褐化控制 | 第41页 |
| ·受体阶段的选择 | 第41-42页 |
| ·抗生素敏感性试验 | 第42页 |
| ·分化、生根壮苗及移栽 | 第42-43页 |
| 第三章 根癌农杆菌介导的ACS反义基因转化蝴蝶兰研究 | 第43-51页 |
| 1 材料与方法 | 第43-45页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-45页 |
| ·农杆菌抗生素敏感性试验 | 第43页 |
| ·农杆菌转化蝴蝶兰受体系统步骤 | 第43页 |
| ·除菌 | 第43-44页 |
| ·抗性筛选与保持 | 第44页 |
| ·根癌农杆菌介导转化蝴蝶兰原球茎的影响因素研究 | 第44页 |
| ·GUS组织化学法检测 | 第44-45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-49页 |
| ·共培养时间的选择 | 第45-46页 |
| ·农杆菌重悬液浓度对GUS瞬时表达的影响 | 第46-47页 |
| ·农杆菌接菌时间对GUS瞬时表达的影响 | 第47页 |
| ·外植体预培养对GUS瞬时表达的影响 | 第47页 |
| ·外植体的处理方法对GUS瞬时表达的影响 | 第47-48页 |
| ·外植体前处理对GUS瞬时表达的影响 | 第48页 |
| ·原球茎的生理状态对GUS瞬时表达的影响 | 第48-49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| 1 酚类物质对农杆菌侵染蝴蝶兰原球茎的影响 | 第49页 |
| 2 共培养时间对蝴蝶兰转化效率的影响 | 第49-50页 |
| 3 农杆菌重悬液浓度及接菌时间对蝴蝶兰转化效率的影响 | 第50页 |
| 4 外植体的甘露醇处理对蝴蝶兰转化效率的影响 | 第50页 |
| 5 外植体的预培养及处理方式对蝴蝶兰转化效率的影响 | 第50-51页 |
| 第四章 抗性原球茎的筛选、植株再生及检测 | 第51-56页 |
| 1 材料与方法 | 第51-52页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-52页 |
| ·抗性原球茎的筛选 | 第51-52页 |
| ·抗性原球茎的继代增殖 | 第52页 |
| ·抗性原球茎的分化培养 | 第52页 |
| ·生根培养 | 第52页 |
| ·再生植株的GUS组织化学法检测 | 第52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-54页 |
| ·蝴蝶兰抗性原球茎的筛选情况 | 第52-53页 |
| ·蝴蝶兰抗性原球茎继代增殖 | 第53页 |
| ·抗性原球茎的分化培养 | 第53页 |
| ·生根培养 | 第53页 |
| ·抗性植株的GUS组织化学法检测 | 第53-54页 |
| 3.讨论 | 第54-56页 |
| ·转化体的选择方法 | 第54页 |
| ·转化体的嵌合体问题 | 第54-55页 |
| ·转基因再生植株的基因表达问题 | 第55页 |
| ·关于没有对再生植株进行Southern检测的说明 | 第55-56页 |
| 第五章 蝴蝶兰ACS基因的分离与克隆 | 第56-65页 |
| 1 材料与试剂 | 第56页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·试剂和酶 | 第56页 |
| ·仪器与设备 | 第56页 |
| 2 方法 | 第56-60页 |
| ·总RNA的提取 | 第56-57页 |
| ·总RNA含量和纯度的测定 | 第57页 |
| ·总RNA的电泳分析 | 第57页 |
| ·总RNA的逆转录反应 | 第57页 |
| ·逆转录反应试剂 | 第57页 |
| ·逆转录反应过程 | 第57页 |
| ·蝴蝶兰ACS基因的获得 | 第57-58页 |
| ·引物的选用与合成 | 第57页 |
| ·PCR反应 | 第57-58页 |
| ·PCR产物的回收与克隆 | 第58-60页 |
| ·菌株与试剂 | 第58页 |
| ·PCR产物的回收及检测 | 第58页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第58-59页 |
| ·重组子筛选及插入片段的菌液PCR检测 | 第59-60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-62页 |
| ·蝴蝶兰唇瓣总RNA的提取结果 | 第60页 |
| ·蝴蝶兰唇瓣ACS基因保守区序列的获得与分析 | 第60-62页 |
| 4 讨论 | 第62-65页 |
| ·总RNA的提取 | 第62-63页 |
| ·克隆结果的讨论 | 第63-65页 |
| 第六章 小结 | 第65-68页 |
| 1 蝴蝶兰遗传转化再生系统的优化 | 第65-66页 |
| ·蝴蝶兰细小原球茎受体系统的建立 | 第65页 |
| ·蝴蝶兰细小原球茎受体系统培养的优化 | 第65-66页 |
| ·蝴蝶兰基因转化筛选系统的选择 | 第66页 |
| 2 根癌农杆菌介导蝴蝶兰原球茎转化系统的优化 | 第66页 |
| 3 抗性植株的筛选、再生及检测 | 第66-67页 |
| 4 ACS基因保守序列克隆 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 附录 图版及图版说明 | 第76-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
