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桐花树双孔通道基因(AcTPC1)的克隆与初步研究

摘要(中文)第1-10页
摘要(英文)第10-12页
第一部分 前言第12-18页
   ·钙离子(Ca~(2+))第12页
   ·双孔通道(TPC1)第12-16页
   ·研究的目的和意义第16-18页
第二部分 材料和方法第18-42页
   ·实验材料第18页
   ·实验仪器设备和耗材第18页
   ·实验试剂和溶液第18-26页
     ·基因组提取和电泳第18-19页
     ·质粒提取第19-20页
     ·RNA 提取第20-21页
     ·甲醛变性凝胶RNA 电泳第21-22页
     ·RNA 的反转录和PCR 扩增第22-23页
     ·桐花树AcTPC1 基因的原核表达第23页
     ·SDS-PAGE第23-24页
     ·酵母CCH1 基因敲除和AcTPC1 功能互补实验第24-26页
   ·实验方法第26-42页
     ·基因组DNA 提取方法第26页
     ·基因组DNA 的电泳第26页
     ·基因组TPC1 基因片段的扩增第26-27页
     ·切胶回收PCR 产物第27-28页
     ·T-A 克隆第28页
     ·大肠杆菌感受态的制备第28页
     ·重组质粒转化大肠杆菌感受态第28-29页
     ·大肠杆菌质粒DNA 的提取(碱裂解法)第29页
     ·测序第29页
     ·桐花树RNA 的提取第29-30页
     ·RNA 的电泳第30-31页
     ·cDNA 第一链的合成第31页
     ·PCR 扩增TPC1 基因片段第31页
     ·质粒的酶切鉴定第31-32页
     ·桐花树TPC1 的3’RACE第32-33页
     ·桐花树TPC1 的5’RACE第33-36页
     ·RT-PCR 扩增全长AcTPC1 基因第36页
     ·桐花树AcTPC1 基因的原核表达第36-37页
     ·SDS-PAGE 分析AcTPC1 蛋白第37-38页
     ·酵母CCH1 基因敲除第38-40页
     ·AcTPC1 功能互补实验第40-42页
第三部分 结果、分析和讨论第42-74页
   ·基因组DNA 提取结果第42-44页
   ·基因组 TPC1 基因片段的 PCR 扩增第44-46页
   ·基因组TPC1 基因片段的测序结果第46-52页
   ·桐花树RNA 的提取结果第52-54页
   ·PCR 扩增TPC1 基因片段第54-57页
   ·桐花树 TPC1 基因片段的生物学分析第57-59页
   ·3’RACE 扩增桐花树TPC1 基因下游第59-62页
   ·5’RACE 扩增桐花树TPC1 基因上游第62-64页
   ·RT-PCR 扩增桐花树全长AcTPC1 基因第64-65页
   ·桐花树 AcTPC1 基因的生物信息学分析第65-68页
   ·SDS-PAGE 分析AcTPC1 蛋白第68-70页
   ·酵母CCH1 基因敲除和AcTPC1 功能互补实验第70-74页
第四部分 总结和展望第74-76页
参考文献第76-78页

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