| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-16页 |
| 本文所用英文缩写词表 | 第16-18页 |
| 第1章 绪论 | 第18-33页 |
| ·基因表达产物检测的重要性 | 第18-20页 |
| ·基因表达产物常用检测技术及其优缺点 | 第20-22页 |
| ·荧光分子探针技术及其在基因表达产物检测中的应用 | 第22-30页 |
| ·FRET 的发生原理 | 第22-23页 |
| ·FRET 能量供受体对的成员 | 第23-30页 |
| ·本论文拟开展的工作 | 第30-33页 |
| 第2章 基于双链荧光探针对UDG 酶的活性分析 | 第33-44页 |
| ·前言 | 第33页 |
| ·实验部分 | 第33-36页 |
| ·实验设计原理 | 第33-34页 |
| ·仪器与试剂 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-36页 |
| ·实验结果与讨论 | 第36-43页 |
| ·双链荧光探针发生FRET 效率的检测结果 | 第36-37页 |
| ·尿嘧啶切割反应的实时监测 | 第37-38页 |
| ·外界因子对尿嘧啶切割反应的影响 | 第38-39页 |
| ·UDG 酶活性分析 | 第39-40页 |
| ·反应机理与动力学模型的讨论 | 第40-41页 |
| ·肿瘤细胞中UDG 表达水平检测 | 第41-43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| 第3章 基于双链荧光探针对 APE1 酶的活性分析 | 第44-55页 |
| ·前言 | 第44页 |
| ·实验部分 | 第44-47页 |
| ·实验设计原理 | 第44-45页 |
| ·仪器与试剂 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-47页 |
| ·实验结果与讨论 | 第47-53页 |
| ·UDG 酶作用对探针荧光信号的影响 | 第47-48页 |
| ·AP 位点水解反应的实时监测 | 第48-49页 |
| ·APE1 的活性定量分析 | 第49-50页 |
| ·外界因子对水解反应的影响 | 第50-51页 |
| ·化学药物对APE1 活性的影响 | 第51-52页 |
| ·反应机理与动力学模型的讨论 | 第52-53页 |
| ·肿瘤细胞中APE1 表达水平检测 | 第53页 |
| ·小结 | 第53-55页 |
| 第4章 基于双链荧光探针对 T4DNA 连接酶的活性分析 | 第55-63页 |
| ·前言 | 第55页 |
| ·实验部分 | 第55-58页 |
| ·实验设计原理 | 第55-56页 |
| ·试剂与仪器 | 第56-57页 |
| ·实验方法 | 第57-58页 |
| ·实验结果与讨论 | 第58-62页 |
| ·双链荧光探针发生FRET 的效率检测 | 第58页 |
| ·T4 DNA 连接酶催化的连接反应实时监测 | 第58-59页 |
| ·金属离子对DNA 连接反应的影响 | 第59-60页 |
| ·药物对DNA 连接反应的影响 | 第60-61页 |
| ·T4 DNA 连接酶的活性分析 | 第61-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 第5章 基于分子信标对hOGG1 酶的活性分析 | 第63-71页 |
| ·前言 | 第63页 |
| ·实验部分 | 第63-66页 |
| ·实验原理 | 第63-64页 |
| ·试剂和仪器 | 第64-66页 |
| ·实验结果与讨论 | 第66-70页 |
| ·分子信标M81 的性能检测结果 | 第66页 |
| ·分子信标M81 热稳定性分析 | 第66页 |
| ·8-oxoG 切割反应的实时监测 | 第66-67页 |
| ·外界因子对hOGG1 酶活性的影响 | 第67页 |
| ·hOGG1 对80xoA 切割能力考察 | 第67-68页 |
| ·hOGG1 的活性分析 | 第68页 |
| ·酶促反应的动力学研究 | 第68-69页 |
| ·肿瘤细胞中hOGG1 表达活性分析 | 第69-70页 |
| ·小结 | 第70-71页 |
| 第6章 基于分子信标对 ING1 m RNA 的定量检测.. | 第71-81页 |
| ·前言 | 第71-72页 |
| ·实验部分 | 第72-76页 |
| ·实验材料 | 第72页 |
| ·仪器与试剂 | 第72-73页 |
| ·实验方法 | 第73-76页 |
| ·结果与讨论 | 第76-80页 |
| ·转染ING1 的MCF-7 细胞系的建立 | 第76页 |
| ·ING1cRNA 的制备和标准曲线的建立 | 第76-77页 |
| ·MB/cRNA 杂交影响因子考察 | 第77-78页 |
| ·5-FU 处理MCF-7 细胞引起ING1 转录水平升高 | 第78页 |
| ·ING1 转染引起MCF-7 细胞中ING1 mRNA 水平升高 | 第78-79页 |
| ·抑制p53 基因表达引起ING1 转录水平下调 | 第79-80页 |
| ·小结 | 第80-81页 |
| 第7章 基于分子信标对p21m RNA 的体外定量检测 | 第81-90页 |
| ·前言 | 第81页 |
| ·实验部分 | 第81-84页 |
| ·结果与讨论 | 第84-89页 |
| ·p21cDNA 的电泳检测和序列测定 | 第84-85页 |
| ·p21MB 特异性和热力学特性考察 | 第85-86页 |
| ·p21 MB/cRNA 杂交影响因子考察 | 第86-87页 |
| ·p21 cRNA/MB 杂交标准曲线的构建 | 第87页 |
| ·5-FU 处理MCF-7 细胞引起p21m RNA 水平升高 | 第87-88页 |
| ·ING1 高表达的MCF-7 细胞中p21m RNA 水平升高 | 第88页 |
| ·抑制p53 基因表达引起p21mRNA 水平下调 | 第88-89页 |
| ·小结 | 第89-90页 |
| 第8章 基于分子信标对HNE1 细胞ING1mRNA 检测与生物学特性分析 | 第90-98页 |
| ·前言 | 第90页 |
| ·实验部分 | 第90-93页 |
| ·试剂和仪器 | 第90-91页 |
| ·实验方法 | 第91-93页 |
| ·结果与讨论 | 第93-97页 |
| ·应用MB 检测细胞中p331NG1 mRNA 的表达 | 第93-94页 |
| ·MB 用于固定化细胞中p331NG1m RNA 成像 | 第94页 |
| ·细胞生长速度测定和ING1 蛋白表达检测 | 第94-95页 |
| ·免疫组化法确定P53 蛋白的表达分布 | 第95页 |
| ·p33~(ING1) 高表达促使细胞周期停滞于G1 期 | 第95-97页 |
| ·小结 | 第97-98页 |
| 结论 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-116页 |
| 附录 A 攻读学位期间发表的学术论文和授权专利 | 第116-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
