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产聚羟基脂肪酸酯微生物的筛选及性质研究

摘要第1-11页
Abstract第11-14页
第一章 文献综述第14-33页
 1 聚羟基脂肪酸酯的简介第14-29页
   ·PHA 的研究历史第14页
   ·PHA 的结构及分类第14-16页
   ·PHB 的结构及理化性质第16-17页
   ·PHB 的生物合成第17-21页
     ·合成PHB 的微生物第17-18页
     ·合成PHB 的碳源第18页
     ·合成酶(PHA synthases,PhaC)第18-20页
       ·聚羟基脂肪酸酯相关代谢酶简介第18-19页
       ·PHA 合成酶的结构第19-20页
     ·PHB 的代谢合成途径第20-21页
   ·PHB 的主要生产途径第21-23页
     ·利用微生物或组建基因工程菌发酵生产第21-22页
     ·利用活性污泥生产和提取PHB第22页
     ·利用转基因植物生产PHB第22-23页
     ·化学法合成PHB第23页
   ·微生物发酵生产PHB 的研究现状第23-25页
     ·国外PHB 发酵生产研究概况第24页
     ·国内PHB 研究概况第24-25页
   ·PHB 的提取第25页
   ·PHB 的检测方法第25-28页
     ·染色法第25-26页
     ·重量分析法第26页
     ·高效液相色谱法(HPLC)第26页
     ·气相色谱法(GC)第26-27页
     ·核磁共振法(NMR)第27页
     ·PHA 的傅立叶红外光谱((FT-IR)分析方法第27页
     ·二维傅立叶红外光谱学技术(2D FT—IR)第27-28页
   ·PHB 的应用第28-29页
     ·PHB 在医药领域中的应用第28页
     ·PHB 在组织工程的应用第28-29页
     ·在工农业上的应用第29页
     ·其它应用第29页
 2 利用生物信息学分析PhaC第29-31页
   ·系统进化分析第30页
   ·基因水平转移第30-31页
 3 论文研究的目的意义及展望第31-33页
   ·论文的目的和意义第31-32页
   ·PHB 的研究展望第32-33页
第二章 产聚羟基脂肪酸酯菌株的筛选鉴定第33-50页
 1 材料与仪器第33-36页
   ·仪器及主要试剂第33-34页
   ·实验材料第34页
   ·培养基的配制第34-36页
 2 实验方法第36-42页
   ·制备活性污泥梯度稀释液第36页
   ·菌种的分离纯化第36页
   ·尼罗红染色法测定第36页
   ·产PHB 菌株的筛选第36-37页
     ·初筛第36-37页
     ·复筛第37页
     ·种子培养第37页
   ·菌种鉴定第37-42页
     ·形态特征观察第37页
     ·生理生化反应特征第37页
     ·对碳源和氮源利用实验第37页
     ·16SrDNA 的PCR 扩增、序列测定和系统发育分析第37-42页
       ·配制溶液第38页
       ·E.coliDH5a 感受态细胞的制备第38-39页
       ·PCR 扩增16SrDNA第39页
       ·琼脂糖凝胶电泳分析第39-40页
       ·电泳产物胶回收第40页
       ·连接第40页
       ·转化第40-41页
       ·重组质粒菌落的蓝白斑筛选第41页
       ·抽提质粒电泳验证第41-42页
       ·16SrDNA 保守序列测定及同源性分析第42页
 3 结果与分析第42-50页
   ·产PHB 菌株的筛选第42-43页
   ·菌株的鉴定第43-46页
     ·细胞形态和结构特征第43-45页
     ·菌株的生理生化特征第45页
     ·菌株对不同碳源的利用情况第45-46页
     ·菌株对不同氮源的利用第46页
   ·菌株16SrDNA 保守序列测定及同源性分析结果第46-50页
     ·质粒电泳验证结果第46-47页
     ·16SrDNA 保守序列测定及同源性分析结果第47-50页
第三章 产物的性质分析第50-58页
 1 材料与仪器第50-51页
   ·主要试剂及仪器第50页
   ·实验材料第50-51页
 2 实验方法第51-53页
   ·菌体干质量的测定第51页
   ·PHB 的制备第51页
   ·PHB 含量的测定第51页
   ·产物PHB 的定性定量鉴定第51-53页
     ·荧光显微镜镜检定性第51-52页
     ·气象色谱检测第52-53页
       ·样品制备第52页
       ·标准样制备第52-53页
       ·GC 分析第53页
   ·PHB 降解性测定第53页
     ·PHB 膜的制备第53页
     ·降解性测定第53页
 3 结果与分析第53-58页
   ·紫外分光光度计检测PHB 的含量第53-54页
   ·PHB 的荧光检测第54-55页
   ·PHB 产物的GC 检测第55-56页
   ·PHB 的降解性能研究第56-58页
第四章 菌株产PHB 的发酵条件的研究第58-72页
 1 材料和仪器第58-59页
   ·材料第58-59页
     ·菌株第58页
     ·主要试剂及仪器第58-59页
 2 实验方法第59-61页
   ·发酵培养基的优化第59-60页
     ·不同碳源对菌体生长及PHB 积累的影响第59页
     ·不同氮源对菌体生长及PHB 积累的影响第59页
     ·发酵培养基配方正交试验第59-60页
   ·发酵条件的优化第60-61页
     ·培养时间对菌体积累PHB 的影响第60页
     ·培养基初始PH 对菌体积累PHB 的影响第60页
     ·培养温度对第60页
     ·培养基葡萄糖浓度对菌体积累PHB 的影响第60-61页
     ·培养基装量对菌体积累PHB 的影响第61页
     ·发酵培养条件正交试验第61页
 3 结果与分析第61-72页
   ·不同碳源对菌体生长及PHB 积累的影响第61-62页
   ·不同氮源对菌体生长及PHB 积累的影响第62-63页
   ·培养基正交试验结果第63页
   ·培养时间对菌体积累PHB 的影响第63-64页
   ·培养基初始PH 对菌体积累PHB 的影响第64-65页
   ·培养温度对菌体积累PHB 的影响第65-66页
   ·培养基葡萄糖浓度对菌体积累PHB 的影响第66-67页
   ·培养基装量对菌体积累PHB 的影响第67-68页
   ·发酵培养条件正交试验第68-72页
     ·各因素间的相互作用对PHB 含量的影响第69-72页
第五章 进化分析第72-80页
 1 材料和仪器第72页
 2 实验方法第72页
 3 结果分析第72-80页
第六章 结论第80-81页
参考文献第81-88页
致谢第88-89页
攻读学位期间发表论文情况第89页

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