| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 英文缩写符号及其中英文对照表 | 第12-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-33页 |
| 1 RNA 沉默 | 第15-28页 |
| ·RNA 沉默的发现 | 第16-19页 |
| ·PTGS | 第16-18页 |
| ·压制与RNA 干涉 | 第18页 |
| ·病毒诱导的基因沉默 | 第18-19页 |
| ·参与RNA 沉默的细胞组分 | 第19-23页 |
| ·相关酶及其编码基因 | 第21-22页 |
| ·dsRNA 和siRNA | 第22-23页 |
| ·RNA 沉默的机制 | 第23-28页 |
| 2 RNA 沉默介导的抗病性 | 第28-29页 |
| 3 RNA 沉默的抑制现象 | 第29-31页 |
| ·低温环境对RNA 沉默的影响 | 第29-30页 |
| ·病毒对RNA 沉默的影响 | 第30-31页 |
| 4 本课题的研究目的及意义 | 第31-33页 |
| 第二部分 研究报告 | 第33-80页 |
| 第一章 T4 代转基因植株的分子分析 | 第34-59页 |
| 1 材料与方法 | 第34-49页 |
| ·试验材料 | 第34-35页 |
| ·植物材料 | 第34页 |
| ·菌株、质粒与毒源 | 第34页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第34-35页 |
| ·PCR 引物 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-49页 |
| ·烟草的种植 | 第35页 |
| ·转化植株的卡那霉素抗性筛选、鉴定及扩繁 | 第35-36页 |
| ·转基因植株的PCR 检测 | 第36-37页 |
| ·小量法提取烟草基因组DNA | 第36页 |
| ·大量法提取烟草基因组DNA | 第36-37页 |
| ·PCR 筛选 | 第37页 |
| ·T4 代转基因植株的抗病性鉴定 | 第37-39页 |
| ·转基因植株的接种 | 第37-38页 |
| ·转基因植株的症状鉴定 | 第38页 |
| ·酶联免疫吸附测定检测 | 第38-39页 |
| ·烟草NtRdRP1 基因中间片段的克隆 | 第39-41页 |
| ·用RNeasy Plant Mini Kit 提取总RNA | 第39页 |
| ·RNA 反转录PCR | 第39-41页 |
| ·烟草 NtRdRP1 基因的测序 | 第41-47页 |
| ·目的片段的回收 | 第41-42页 |
| ·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第42页 |
| ·感受态细胞制备 | 第42页 |
| ·转化及筛选 | 第42-43页 |
| ·对重组质粒的鉴定 | 第43-47页 |
| ·序列测定 | 第47页 |
| ·Northern 杂交 | 第47-49页 |
| ·RNA 提取及电泳 | 第47页 |
| ·转膜及烘膜 | 第47-48页 |
| ·探针的合成 | 第48页 |
| ·预杂交及杂交 | 第48-49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-57页 |
| ·T4 代M11 植株转基因检测 | 第49-51页 |
| ·T4 代M11 植株Kanr 抗性检测 | 第49-50页 |
| ·T4 代M11 植株PCR 检测 | 第50-51页 |
| ·T4 代M11 植株抗病表现型及ELISA 检测 | 第51页 |
| ·T4 代 M11 植株 PVY~N CP 转基因积累量分析 | 第51-53页 |
| ·NtRdRP1 基因表达量的分析 | 第53-57页 |
| ·NtRdRP1 中间片段的克隆 | 第53-56页 |
| ·烟草RNA 的提取及反转录 | 第53-54页 |
| ·RT-PCR 扩增目的基因 | 第54页 |
| ·烟草NtRdRP1 中间片段的鉴定、测序 | 第54-56页 |
| ·发生转基因沉默植株中 NtRdRP1 表达量的分析 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| ·M11 的高度抗病性在T4 代的遗传稳定性 | 第57页 |
| ·T4 代M11 的高度抗病性与RNA 沉默的关系 | 第57-58页 |
| ·NtRdRP1 表达与RNA 沉默的关系 | 第58-59页 |
| 第二章 生物与非生物胁迫对RNA 沉默介导抗病性的影响 | 第59-80页 |
| 1 材料与方法 | 第59-60页 |
| ·试验材料 | 第59-60页 |
| ·植物材料 | 第59页 |
| ·菌株与质粒 | 第59页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第59-60页 |
| ·实验方法 | 第60页 |
| ·烟草的种植 | 第60页 |
| ·转基因植株的卡那霉素抗性筛选鉴定及扩繁 | 第60页 |
| ·转基因植株的PCR 检测 | 第60页 |
| ·转基因植株的接种 | 第60页 |
| ·转基因烟草的温度处理 | 第60页 |
| ·转基因植株的症状鉴定及ELISA 检测 | 第60页 |
| ·Northern 杂交 | 第60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-77页 |
| ·T4 代转基因植株的获得、筛选及检测 | 第60页 |
| ·低温环境对RNA 沉默及其介导抗性的影响 | 第60-65页 |
| ·低温打破转基因高抗植株的抗病性 | 第61-63页 |
| ·温度与转基因植株的RNA 沉默的关系 | 第63-64页 |
| ·温度对植株NtRdRP1 表达的影响 | 第64-65页 |
| ·病毒侵染对RNA 沉默及其介导的抗病性的影响 | 第65-77页 |
| ·PVX 和TMV 侵染对植株抗病性的影响 | 第65-74页 |
| ·PVX、TMV 侵染对转基因沉默影响的分子分析 | 第74-76页 |
| ·PVX、 TMV 侵染对植株 NtRdRP1 基因表达量的影响 | 第76-77页 |
| 3 讨论 | 第77-80页 |
| ·低温对RNA 沉默及其介导的抗病性的影响 | 第77-78页 |
| ·低温对NtRdRP1 基因表达的影响 | 第78页 |
| ·PVX 和TMV 侵染对RNA 沉默及其介导的抗病性的影响 | 第78-79页 |
| ·PVX 和TMV 侵染与NtRdRP1 基因表达的关系 | 第79-80页 |
| 小结 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-89页 |
| 附录1 常用缓冲液及培养基的配制 | 第89-93页 |
| 附录2 入学以来已形成的研究论文 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
