| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 1 前言 | 第12-25页 |
| ·我国海水养殖鱼类病害研究概况 | 第12页 |
| ·鱼病病原体 | 第12-13页 |
| ·海洋弧菌 | 第13-23页 |
| ·海洋弧菌的分布与重要性 | 第14页 |
| ·病原性海洋弧菌 | 第14-16页 |
| ·发光性海洋弧菌 | 第16-17页 |
| ·多糖分解性海洋弧菌 | 第17页 |
| ·固氮性海洋弧菌 | 第17-18页 |
| ·病原弧菌的致病因子——溶血素 | 第18-23页 |
| ·TDH及其相关溶血素 | 第20页 |
| ·HlyA及其相关溶血素 | 第20-21页 |
| ·TLH 及其相关溶血素 | 第21-22页 |
| ·δ-VPH 及其相关溶血素 | 第22-23页 |
| ·HLX 及其相关溶血素 | 第23页 |
| ·本论文研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-41页 |
| ·菌株和质粒 | 第25-28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·试剂和仪器 | 第28页 |
| ·Southern Blot 检测五类溶血素基因在弧菌中的分布 | 第28-32页 |
| ·海洋弧菌DNA 的提取 | 第28-29页 |
| ·五种探针引物设计及合成 | 第29-30页 |
| ·地高辛(DIG)标记的五类溶血素基因探针的合成 | 第30-31页 |
| ·Southern blotting 分析溶血素基因在不同菌株中的分布 | 第31-32页 |
| ·七种弧菌vhh | 第32-36页 |
| ·溶血素基因vhh/tlh 的引物设计及合成 | 第32-33页 |
| ·七种弧菌溶血素基因vhh/tlh 的PCR 扩增 | 第33页 |
| ·扩增产物的检测及纯化 | 第33-34页 |
| ·PCR 纯化产物与 pUCm-T 载体的连接 | 第34页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·重组质粒的转化 | 第34-35页 |
| ·质粒提取 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第36页 |
| ·绘制进化树 | 第36页 |
| ·鱼血平板溶血试验 | 第36-37页 |
| ·磷脂酶活性测定 | 第37页 |
| ·坎贝氏弧菌TLH 溶血素基因的克隆、表达研究 | 第37-41页 |
| ·坎贝氏弧菌TLH 溶血素基因的克隆 | 第37页 |
| ·pET-24d(+)/tlh 表达质粒的构建及鉴定 | 第37-39页 |
| ·引物设计及合成 | 第37页 |
| ·质粒DNA 提取 | 第37-38页 |
| ·坎贝氏弧菌溶血素基因 tlh 的 PCR 扩增 | 第38页 |
| ·扩增产物的检测及纯化 | 第38页 |
| ·pET-24d(+)/tlh 表达质粒的构建 | 第38-39页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第39页 |
| ·pET-24d(+)/tlh 质粒的转化 | 第39页 |
| ·pET-24d(+)/tlh 表达质粒的鉴定 | 第39页 |
| ·坎贝氏弧菌溶血素基因tlh在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达 | 第39-41页 |
| ·坎贝氏弧菌溶血素基因tlh 在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达 | 第39-40页 |
| ·坎贝氏弧菌溶血素基因 tlh 表达蛋白的 SDS-PAGE 电泳检测 | 第40页 |
| ·重组菌 BL21(DE3)/pET-24d(+)/tlh 的鱼血平板溶血试验 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-60页 |
| ·五类溶血素基因在不同弧菌中的分布 | 第41-51页 |
| ·地高辛（DIG）标记的溶血素基因探针的合成 | 第41-43页 |
| ·Southern blotting 分析五类溶血素基因在不同弧菌菌株中的分布 | 第43-51页 |
| ·TLH 溶血素基因的分布 | 第46-48页 |
| ·TDH 溶血素基因的分布 | 第48-49页 |
| ·HlyA 溶血素基因的分布 | 第49页 |
| ·δ-VPH 溶血素基因的分布 | 第49页 |
| ·HLX 溶血素基因的分布 | 第49-51页 |
| ·七种弧菌vhh | 第51-57页 |
| ·七种弧菌溶血素基因vhh/tlh 的PCR 扩增 | 第51-53页 |
| ·pUCm-T/tlh 重组质粒的构建及鉴定 | 第53-55页 |
| ·七种弧菌溶血素基因vhh/tlh 的测序结果 | 第55页 |
| ·七种弧菌溶血素基因vhh/tlh 的氨基酸序列与 VHH 及 TLH 氨基酸序列的比对结果 | 第55页 |
| ·绘制进化树 | 第55-57页 |
| ·溶血活性的测定 | 第57页 |
| ·磷脂酶活性的测定 | 第57页 |
| ·坎贝氏弧菌溶血素基因tlh 的表达 | 第57-60页 |
| ·pET-24d(+)/tlh 表达质粒的构建及鉴定 | 第57-58页 |
| ·坎贝氏弧菌溶血素基因 tlh 的表达 | 第58-59页 |
| ·重组菌 BL21(DE3)/pET-24d(+)/tlh 的溶血试验 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| 5 小结 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 附录I 溶液配方 | 第71-73页 |
| 附录II 序列比对结果 | 第73-79页 |
| 附录III 七种弧菌溶血素基因 vhh/tlh 的测序结果 | 第79-83页 |
| 附录IV GenBank 中 15 个溶血素基因序列 | 第83-94页 |
| 附录V 七种弧菌溶血素基因 vhh/tlh 的氨基酸序列与 VHH 及 TLH 氨基酸序列的比对结果 | 第94-96页 |
| 附录VI TLH 溶血素中的脂酶和磷脂酶结构域 | 第96-97页 |
| 附录VII 发表和撰写的文章 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
