| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 第一章 应用高速逆流色谱大规模化和厚朴酚与厚朴酚 | 第10-24页 |
| ·前言 | 第10-12页 |
| ·实验部分 | 第12-16页 |
| ·实验试剂与实验样品 | 第12页 |
| ·实验仪器 | 第12-13页 |
| ·样品制备 | 第13页 |
| ·选择两相溶剂系统 | 第13-14页 |
| ·两相体系的配制与样品的溶解 | 第14页 |
| ·MINI-DE CCC分离程序 | 第14页 |
| ·采用MINI-DE CCC优化分离条件 | 第14-15页 |
| ·流速的优化 | 第14-15页 |
| ·进样浓度的优化 | 第15页 |
| ·进样量的优化 | 第15页 |
| ·MAXI-DE CCC分离程序 | 第15页 |
| ·高效液相色谱分析MINI-DE CCC馏分 | 第15-16页 |
| ·结果和讨论 | 第16-22页 |
| ·MINI-DE CCC分离和厚朴酚与厚朴酚 | 第16-19页 |
| ·选择两相体系 | 第16页 |
| ·流速优化 | 第16-17页 |
| ·样品浓度优化 | 第17-18页 |
| ·进样量的优化 | 第18-19页 |
| ·和厚朴酚与厚朴酚结构与纯度鉴定 | 第19页 |
| ·预测MAXI-DE CCC分离条件 | 第19页 |
| ·MAXI-DE CCC分离厚朴酚与和厚朴酚 | 第19-22页 |
| ·HPLC分析分离组分 | 第19-21页 |
| ·固定相的保留 | 第21页 |
| ·采用MAXI-DE大规模纯化和厚朴酚 | 第21-22页 |
| ·结论 | 第22-24页 |
| 第二章 定量蛋白组学:应用SILAC(稳定同位素标记法)研究和厚朴酚治疗肝癌细胞HepG2 | 第24-59页 |
| ·前言 | 第24-28页 |
| ·实验材料 | 第28-29页 |
| ·细胞株 | 第28页 |
| ·试剂和材料 | 第28页 |
| ·实验仪器和设备 | 第28-29页 |
| ·实验方法: | 第29-41页 |
| ·实验流程图: | 第29-30页 |
| ·试剂配置 | 第30-32页 |
| ·细胞培养所需溶液的配制 | 第30-31页 |
| ·SDS-PAGE和Western blot相关试剂和溶液的配制 | 第31-32页 |
| ·细胞培养 | 第32-34页 |
| ·HepG2细胞复苏 | 第32页 |
| ·细胞计数 | 第32-33页 |
| ·HepG2细胞传代 | 第33页 |
| ·HepG2细胞保种 | 第33-34页 |
| ·HepG2细胞的收集与保存 | 第34页 |
| ·MTT | 第34-35页 |
| ·流式细胞检测细胞凋亡及周期 | 第35页 |
| ·细胞裂解与样品制备 | 第35页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶的灌制 | 第35-36页 |
| ·加样与电泳 | 第36页 |
| ·1D SDS-PAGE(SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳) | 第36页 |
| ·凝胶考马斯亮蓝染色 | 第36-37页 |
| ·质谱鉴定和生物信息学分析 | 第37-38页 |
| ·蛋白条带的切取和保存 | 第37页 |
| ·质谱鉴定(mass spectrometry,MS) | 第37-38页 |
| ·RT-PCR | 第38-39页 |
| ·Trizol法提取RNA | 第38-39页 |
| ·引物的配制与扩征 | 第39页 |
| ·RT-PCR产物电泳分析 | 第39页 |
| ·Westen blot | 第39-41页 |
| ·1D SDS-PAGE(SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳) | 第39-40页 |
| ·蛋白质从凝胶转移至固相支持体 | 第40页 |
| ·硝酸纤维素膜的封闭、抗体的孵育及显色 | 第40-41页 |
| ·结果 | 第41-55页 |
| ·和厚朴酚对HepG2细胞增殖的影响 | 第41-42页 |
| ·和厚朴酚对HepG2细胞周期的影响 | 第42-43页 |
| ·用稳定同位素标记HepG2细胞 | 第43-44页 |
| ·定量蛋白 | 第44-46页 |
| ·总蛋白鉴定 | 第46-48页 |
| ·被和厚朴酚调控蛋白的鉴定 | 第48-49页 |
| ·生物信息学分析 | 第49-52页 |
| ·PCR验证 | 第52-53页 |
| ·Westen-blot | 第53-55页 |
| ·讨论 | 第55-59页 |
| 第三章 综述:高速逆流色谱的研究进展及和厚朴酚抗肿瘤作用机理 | 第59-78页 |
| ·高速逆流色谱 | 第59-66页 |
| ·高速逆流色谱分离原理 | 第59-61页 |
| ·溶剂系统的选择 | 第61-62页 |
| ·溶剂体系的要求 | 第61页 |
| ·溶剂体系的选择 | 第61-62页 |
| ·高速逆流色谱的应用 | 第62-64页 |
| ·天然产物 | 第62-63页 |
| ·抗生素 | 第63页 |
| ·蛋白质和肽 | 第63-64页 |
| ·其他 | 第64页 |
| ·高速逆流色谱的新进展 | 第64-66页 |
| ·与质谱联用 | 第64-65页 |
| ·pH区带逆流色谱和离子对逆流色谱 | 第65-66页 |
| ·总结 | 第66页 |
| ·厚朴 | 第66-69页 |
| ·厚朴的形态特征 | 第66-67页 |
| ·厚朴的化学成分 | 第67页 |
| ·厚朴的药理作用 | 第67-69页 |
| ·对胃肠活动的影响 | 第67页 |
| ·抗菌、抗病毒作用 | 第67-68页 |
| ·肌肉松弛和中枢抑制作用 | 第68-69页 |
| ·和厚朴酚 | 第69-78页 |
| ·和厚朴酚的理化性质 | 第69-70页 |
| ·和厚朴酚的抗肿瘤作用 | 第70-72页 |
| ·和厚朴酚的细胞毒作用 | 第70页 |
| ·和厚朴酚对肿瘤新生血管的抑制作用 | 第70页 |
| ·和厚朴酚诱导细胞分化 | 第70-71页 |
| ·和厚朴酚诱导细胞凋亡的作用 | 第71页 |
| ·抑制酶的活性 | 第71-72页 |
| ·抑制DNA、RNA和(或)蛋白质的合成 | 第72页 |
| ·总结 | 第72-78页 |
| 作者及指导教师简介 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
