| 缩写词 | 第1-15页 |
| 摘要 | 第15-17页 |
| Abstract | 第17-20页 |
| 前言 | 第20-22页 |
| 1 文献综述 | 第22-44页 |
| ·植物花粉发育的研究进展 | 第22-31页 |
| ·植物花粉的发育过程 | 第22-23页 |
| ·花粉发育的细胞学研究 | 第23-25页 |
| ·绒毡层与花粉发育 | 第23-24页 |
| ·细胞骨架与花粉发育 | 第24页 |
| ·花粉发育过程中胼胝质壁、淀粉粒及细胞器的动态变化 | 第24-25页 |
| ·ATP酶及Ca~(2+)调控与花粉发育 | 第25页 |
| ·花粉发育的分子机制研究 | 第25-31页 |
| ·花粉发育相关基因的克隆、表达及调控 | 第25-27页 |
| ·花粉发育相关基因的克隆方法 | 第27-29页 |
| ·花粉相关基因功能研究的策略 | 第29-31页 |
| ·植物雄性不育的应用价值与基因工程创建雄性不育 | 第31-33页 |
| ·植物雄性不育的应用价值 | 第31-32页 |
| ·基因工程创建雄性不育 | 第32-33页 |
| ·利用线粒体基因创建雄性不育 | 第32页 |
| ·利用基因沉默方法创建雄性不育 | 第32页 |
| ·通过改变花粉发育过程关键酶的时序表达获得雄性不育 | 第32页 |
| ·利用细胞毒性基因诱导产生雄性不育 | 第32-33页 |
| ·植物非编码RNA的研究 | 第33-38页 |
| ·非编码RNA的种类划分 | 第33-34页 |
| ·非编码RNA的检测与分离方法 | 第34-35页 |
| ·对可能存在非编码RNA区域的识别 | 第34页 |
| ·利用生物信息学方法分析发现ncRNA | 第34-35页 |
| ·利用微点阵技术在基因组水平上检测ncRNA | 第35页 |
| ·分离特定的cDNA克隆用于富集ncRNA | 第35页 |
| ·非编码RNA的功能及其作用机制 | 第35-37页 |
| ·调节植物生长发育 | 第35-36页 |
| ·参与调节mRNA的稳定性及翻译 | 第36页 |
| ·参与RNA加工和修饰 | 第36页 |
| ·影响染色体的结构 | 第36页 |
| ·参与信号传导,适应环境胁迫 | 第36-37页 |
| ·植物中已发现的重要非编码RNA | 第37-38页 |
| ·研究非编码RNA基因的意义 | 第38页 |
| ·植物跨膜蛋白的研究 | 第38-44页 |
| ·跨膜蛋白的理化性质 | 第39页 |
| ·跨膜蛋白的结构预测 | 第39-40页 |
| ·经典的Kyte & Doolittle法预测 | 第39-40页 |
| ·利用"正电荷居内规则"预测 | 第40页 |
| ·通过统计分析和模型参数预测 | 第40页 |
| ·跨膜蛋白的细胞定位 | 第40-41页 |
| ·跨膜蛋白的功能研究 | 第41-44页 |
| 2 白菜花粉非编码RNA基因BcMF11的克隆及表达分析 | 第44-60页 |
| ·材料与方法 | 第44-50页 |
| ·植物材料和主要试剂 | 第44-45页 |
| ·RNA分离及检测 | 第45-46页 |
| ·cDNA的合成 | 第46-47页 |
| ·DNA提取 | 第47页 |
| ·RACE技术扩增基因全长 | 第47-48页 |
| ·cDNA和DNA全长序列的扩增 | 第48页 |
| ·PCR产物的克隆及测序 | 第48-49页 |
| ·基因全长序列的特征分析 | 第49页 |
| ·半定量RT-PCR分析 | 第49页 |
| ·Northern印迹分析 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-57页 |
| ·总RNA的提取与cDNA的合成 | 第50-51页 |
| ·BcMF11的3’末端扩增及测序分析 | 第51-52页 |
| ·BcMF11的5’末端扩增及测序分析 | 第52-53页 |
| ·BcMF11 cDNA和DNA序列全长的分离及克隆 | 第53-54页 |
| ·BcMF11的基本特征分析 | 第54-55页 |
| ·BcMF11的相似性分析 | 第55-56页 |
| ·BcMF11在白菜不同器官的表达特征分析 | 第56页 |
| ·BcMF11在白菜花粉发育不同时期的表达特征分析 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-60页 |
| ·BcMF11,一个新的白菜非编码RNA基因 | 第57-58页 |
| ·BcMF11属于白菜花粉发育过程中持续表达的特异基因 | 第58-60页 |
| 3 芸薹属植物非编码RNA基因BcMF11同源序列的克隆及系统进化分析 | 第60-70页 |
| ·材料与方法 | 第60-62页 |
| ·植物材料与试剂 | 第60-61页 |
| ·DNA的提取 | 第61页 |
| ·同源基因的扩增和克隆 | 第61-62页 |
| ·同源基因的序列特征分析 | 第62页 |
| ·同源序列系统进化分析 | 第62页 |
| ·结果与分析 | 第62-67页 |
| ·BcMF11同源序列的扩增和克隆 | 第62-63页 |
| ·BcMF11同源基因的序列特征分析 | 第63页 |
| ·BcMF11同源基因核苷酸序列相似性比对 | 第63-65页 |
| ·芸薹属植物BcMF11同源基因序列的遗传距离分析 | 第65-66页 |
| ·BcMF11同源基因在芸薹属植物物种中的进化关系分析 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-70页 |
| ·芸薹属植物BcMF11同源基因的序列特征 | 第67-68页 |
| ·芸薹属植物BcMF11同源基因的系统进化 | 第68页 |
| ·BcMF11同源基因功能预测及其应用 | 第68-70页 |
| 4 白菜花粉跨膜蛋白基因BcMF12的克隆及表达分析 | 第70-82页 |
| ·材料与方法 | 第70-73页 |
| ·试验材料 | 第70-71页 |
| ·菌株和主要试剂 | 第71页 |
| ·RNA分离和DNA提取 | 第71页 |
| ·5’/3’RACE | 第71页 |
| ·cDNA和DNA全长序列的克隆和测序 | 第71-72页 |
| ·基因全长序列的特征分析 | 第72页 |
| ·半定量RT-PCR分析 | 第72页 |
| ·Northern杂交分析 | 第72-73页 |
| ·结果与分析 | 第73-80页 |
| ·BcMF12的3’末端扩增及测序分析 | 第73-74页 |
| ·BcMF12的5’末端扩增及测序分析 | 第74-75页 |
| ·BcMF12 cDNA和DNA序列全长的分离及克隆 | 第75-76页 |
| ·BcMF12的核苷酸序列分析 | 第76页 |
| ·BcMF12编码蛋白的基本特征分析 | 第76-77页 |
| ·BcMF12编码蛋白二级结构预测及疏水性分析 | 第77-78页 |
| ·BcMF12的相似性分析 | 第78页 |
| ·BcMF12在白菜不同器官的表达特征分析 | 第78-80页 |
| ·BcMF12在白菜花粉发育不同时期的表达特征分析 | 第80页 |
| ·讨论 | 第80-82页 |
| ·BcMF12,一个新的白菜跨膜蛋白基因 | 第80-81页 |
| ·BcMF12是一个在白菜花粉发育中特异表达的基因 | 第81-82页 |
| 5 反义BcMF11与反义BcMF12植物表达载体的构建及对菜心的遗传转化 | 第82-94页 |
| ·材料与方法 | 第82-86页 |
| ·植物材料、菌株及抗生素 | 第82-83页 |
| ·反义基因片段的扩增与克隆 | 第83-84页 |
| ·CaMV35S启动子及BcA9启动子表达载体的构建 | 第84页 |
| ·双元载体pBI121制备 | 第84页 |
| ·反义基因片段的制备 | 第84页 |
| ·表达质粒的构建过程 | 第84页 |
| ·重组质粒对根癌农杆菌的转化 | 第84-85页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第84页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第84-85页 |
| ·农杆菌中质粒的鉴定 | 第85页 |
| ·反义基因表达载体对菜心的遗传转化 | 第85-86页 |
| ·培养基组成及配制 | 第85页 |
| ·无菌苗的培养 | 第85页 |
| ·预培养 | 第85-86页 |
| ·共培养 | 第86页 |
| ·分化培养 | 第86页 |
| ·继代及生根 | 第86页 |
| ·移栽 | 第86页 |
| ·结果与分析 | 第86-92页 |
| ·BcMF11与BcMF12反义片段的获得 | 第86-88页 |
| ·组成型启动子CaMV35S反义表达载体的构建 | 第88-89页 |
| ·花药绒毡层组织特异型启动子BcA9表达载体的构建 | 第89-90页 |
| ·反义表达载体农杆菌中质粒的鉴定 | 第90-91页 |
| ·反义表达载体菜心转化植株的获得 | 第91-92页 |
| ·讨论 | 第92-94页 |
| ·调控花粉特异基因高效表达的启动子的选择 | 第92页 |
| ·关于菜心的遗传转化 | 第92-94页 |
| 6 BcMF11菜心转基因植株的分子检测及其功能分析 | 第94-106页 |
| ·材料与方法 | 第94-97页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第94-96页 |
| ·植物材料与试剂 | 第94页 |
| ·基因组DNA和总RNA的提取 | 第94-95页 |
| ·PCR检测 | 第95页 |
| ·Southern印迹杂交检测 | 第95页 |
| ·Northern印迹杂交检测 | 第95页 |
| ·X-Glue组织化学染色检测 | 第95-96页 |
| ·转基因植株T_1代种子的Kan~R筛选 | 第96页 |
| ·转基因植株的花粉发育的形态与细胞学观察 | 第96-97页 |
| ·试验材料与试剂 | 第96页 |
| ·花器官的形态学观察 | 第96页 |
| ·花粉的扫描电镜观察 | 第96页 |
| ·花粉发育的组织化学观察 | 第96页 |
| ·花粉萌发试验 | 第96-97页 |
| ·结果与分析 | 第97-104页 |
| ·转基因植株基因组DNA和总RNA的提取 | 第97页 |
| ·反义BcMF11转基因植株的PCR检测 | 第97-98页 |
| ·反义BcMF11转基因植株的Southern印迹杂交检测 | 第98-99页 |
| ·反义BcMF11转基因植株的Northern印迹杂交检测 | 第99页 |
| ·GUS融合基因在转基因菜心中的组织特异性表达 | 第99-100页 |
| ·转基因植株T_1代种子的Kan~R筛选及纯度鉴定 | 第100-101页 |
| ·反义BcMF11转基因植株花器官的形态观察 | 第101页 |
| ·反义BcMF11转基因植株花粉形态的扫描电镜观察 | 第101-102页 |
| ·反义BcMF11转基因植株花粉发育的组织化学观察 | 第102页 |
| ·反义BcMF11转基因植株的花粉萌发 | 第102-104页 |
| ·讨论 | 第104-106页 |
| ·关于反义BcMF11转基因植株的检测 | 第104-105页 |
| ·白菜非编码RNA基因BcMF11的功能分析 | 第105-106页 |
| 7 BcMF12菜心转基因植株的分子检测及其功能分析 | 第106-114页 |
| ·材料与方法 | 第106-107页 |
| ·植物材料与试剂 | 第106页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第106-107页 |
| ·转基因植株花粉的形态与细胞学观察 | 第107页 |
| ·转基因植株授粉柱头的苯胺蓝染色观察 | 第107页 |
| ·结果与分析 | 第107-112页 |
| ·反义BcMF12转基因植株的PCR检测 | 第107-108页 |
| ·反义BcMF12转基因植株的Southern印迹杂交检测 | 第108页 |
| ·反义BcMF12转基因植株的Northern印迹杂交检测 | 第108页 |
| ·GUS融合基因在转基因菜心中的组织特异性表达 | 第108-109页 |
| ·反义BcMF12转基因植株花器官的形态观察 | 第109-110页 |
| ·反义BcMF12转基因植株花粉形态的扫描电镜观察 | 第110-111页 |
| ·反义BcMF12转基因植株花粉的离体萌发 | 第111-112页 |
| ·反义BcMF12转基因植株花粉的体内萌发 | 第112页 |
| ·讨论 | 第112-114页 |
| ·不同启动子对反义BcMF12基因表达的调控 | 第112-113页 |
| ·白菜跨膜蛋白基因BcMF12的功能分析 | 第113-114页 |
| 结论 | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-130页 |
| 博士期间发表的论文 | 第130页 |
