| 独创性声明 | 第1页 |
| 论文使用授权的说明 | 第3-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 缩略词 | 第11-12页 |
| 引言 | 第12-25页 |
| 1 瓜类蔬菜离体培养研究进展 | 第12-15页 |
| ·器官培养 | 第12-14页 |
| ·子叶 | 第13页 |
| ·茎尖 | 第13-14页 |
| ·体细胞胚胎发生 | 第14-15页 |
| ·花药培养 | 第15页 |
| ·原生质体培养 | 第15页 |
| 2 农杆菌介导的植物遗传转化研究进展 | 第15-22页 |
| ·遗传转化方法 | 第16-20页 |
| ·载体介导法 | 第16-18页 |
| ·农杆菌Ti质粒或Ri质粒介导法 | 第16-18页 |
| ·植物病毒载体介导法 | 第18页 |
| ·外源DNA的直接导入法 | 第18-20页 |
| ·瓜类蔬菜遗传转化研究进展 | 第20页 |
| ·植物遗传转化中存在的问题 | 第20-22页 |
| 3 反义RNA技术(ACC合成酶反义基因)在培育延迟保鲜蔬菜上的研究进展 | 第22-23页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 5 本研究的内容 | 第24-25页 |
| 第一章 苦瓜再生体系的建立 | 第25-36页 |
| 1 材料与方法 | 第25-26页 |
| ·植物材料 | 第25页 |
| ·培养基与激素 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-26页 |
| ·种子消毒 | 第25-26页 |
| ·无菌苗的获得 | 第26页 |
| ·不定芽的诱导与伸长 | 第26页 |
| ·诱导生根和移栽 | 第26页 |
| ·统计方法 | 第26页 |
| 2 结果与分析 | 第26-34页 |
| ·种子无菌苗萌发条件的优化 | 第26-29页 |
| ·不同消毒方法对苦瓜种子无菌苗萌发的影响 | 第26-27页 |
| ·不同贮藏时间对种子无菌苗萌发的影响 | 第27-28页 |
| ·培养基类型对发芽率的影响 | 第28页 |
| ·胚放置方式对发芽率的影响 | 第28-29页 |
| ·暗处理对发芽率的影响 | 第29页 |
| ·外植体部位对丛生芽诱导率的影响 | 第29-30页 |
| ·苗龄对子叶节丛生芽诱导的影响 | 第30页 |
| ·不同基因型对丛生芽诱导的影响 | 第30-31页 |
| ·不同激素和浓度配比对丛生芽诱导的影响 | 第31-32页 |
| ·肌醇浓度对丛生芽诱导的影响 | 第32页 |
| ·激素对丛生芽伸长的影响 | 第32-33页 |
| ·不同激素和浓度配比对丛生芽生根的影响 | 第33页 |
| ·移栽 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-36页 |
| 第二章 农杆菌介导的苦瓜遗传转化体系的优化 | 第36-47页 |
| 1 根癌农杆菌介导ACC合成酶反义基因转化苦瓜的初步研究 | 第36-43页 |
| ·材料与方法 | 第36-38页 |
| ·材料 | 第36页 |
| ·转化受体材料 | 第36页 |
| ·供试菌株 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36-37页 |
| ·试验方法 | 第37-38页 |
| ·外植体的获得 | 第37页 |
| ·抗生素敏感性测验 | 第37页 |
| ·预培养、侵染和共培养时间的筛选 | 第37页 |
| ·工程菌液的制备 | 第37页 |
| ·叶盘法转化 | 第37-38页 |
| ·GUS瞬时表达检测 | 第38页 |
| ·药品配制 | 第38页 |
| ·GUS组织化学检测 | 第38页 |
| ·结果分析 | 第38-43页 |
| ·菌株活化时间的确定 | 第38-39页 |
| ·抑菌剂浓度的确定 | 第39页 |
| ·抗生素敏感性 | 第39-40页 |
| ·卡那霉素对苦瓜子叶节诱导丛生芽的影响 | 第39页 |
| ·抑菌剂对苦瓜子叶节诱导不定芽的影响 | 第39-40页 |
| ·预培养、侵染、共培养时间和菌液浓度的确定 | 第40-43页 |
| ·预培养时间的确定 | 第41页 |
| ·共培养时间的确定 | 第41-42页 |
| ·菌液浓度的确定 | 第42-43页 |
| ·浸泡时间的确定 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43页 |
| 2 发根农杆菌介导苦瓜遗传转化的初步研究 | 第43-47页 |
| ·材料与方法 | 第43-44页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·发根农杆菌菌株及其培养 | 第43-44页 |
| ·菌株种类 | 第43-44页 |
| ·菌株的培养与保存 | 第44页 |
| ·转化菌液的制备 | 第44页 |
| ·外植体共感染接种法 | 第44页 |
| ·毛状根的培养 | 第44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-46页 |
| ·外植体类型对发根农杆菌诱导生根能力的影响 | 第44-45页 |
| ·不同的发根农杆菌菌株对诱导苦瓜子叶块生根能力的影响 | 第45页 |
| ·NAA浓度对感染发根农杆菌A的苦瓜子叶节生根能力的影响 | 第45页 |
| ·毛状根的培养 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| 第三章 转基因植株的获得及检测 | 第47-52页 |
| 1 叶盘法转化苦瓜及转基因植株的再生 | 第47-49页 |
| ·技术路线 | 第47-48页 |
| ·受体材料、培养基和菌株 | 第48页 |
| ·无菌苗的获得和转化外植体的准备 | 第48页 |
| ·工程菌液的准备 | 第48页 |
| ·农杆菌的侵染 | 第48-49页 |
| ·转基因植株的获得 | 第49页 |
| 2 转基因植株的检测 | 第49-50页 |
| ·转基因植株基因组DNA微量提取法 | 第49页 |
| ·PCR引物设计与合成 | 第49页 |
| ·PCR反应扩增的体系和扩增条件 | 第49-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50页 |
| ·报告基因的PCR检测 | 第50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| 5 展望 | 第51-52页 |
| 小结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 图版及图版说明 | 第60-66页 |
| 附录Ⅰ | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
