| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 一.前言 | 第10-13页 |
| 二.材料与方法 | 第13-31页 |
| 1.材料与仪器 | 第13-15页 |
| ·菌种和质粒 | 第13页 |
| ·主要试剂 | 第13-14页 |
| ·其它主要试剂的配方 | 第14-15页 |
| ·主要仪器 | 第15页 |
| 2.技术路线 | 第15-16页 |
| 3.奶牛rRNA基因家族的克隆 | 第16-21页 |
| ·奶牛精液基因组DNA的提取 | 第17页 |
| ·PCR扩增 | 第17-18页 |
| ·回收纯化PCR产物 | 第18-19页 |
| ·连接反应 | 第19页 |
| ·连接产物转化宿主大肠杆菌 | 第19-20页 |
| ·重组子的快速鉴定 | 第20-21页 |
| ·质粒抽提 | 第21页 |
| ·测序 | 第21页 |
| 4.pYLSV-TDN筛选载体的构建 | 第21-25页 |
| ·实验设计 | 第21-23页 |
| ·PCR扩增 | 第23页 |
| ·回收纯化PCR或酶切产物 | 第23页 |
| ·酶切反应 | 第23-24页 |
| ·连接反应 | 第24页 |
| ·连接产物转化宿主大肠杆菌 | 第24页 |
| ·重组子的快速鉴定 | 第24-25页 |
| ·质粒抽提 | 第25页 |
| ·鉴定 | 第25页 |
| 5.BAC-TDN大容量筛选载体的构建 | 第25-27页 |
| ·实验设计 | 第25页 |
| ·酶切反应 | 第25页 |
| ·连接反应 | 第25页 |
| ·电击转化大肠杆菌 | 第25-26页 |
| ·BAC抽提 | 第26-27页 |
| ·鉴定 | 第27页 |
| 6.pYLVS-GD表达载体的构建 | 第27-29页 |
| ·实验设计 | 第27-28页 |
| ·PCR扩增 | 第28页 |
| ·回收纯化PCR或酶切产物 | 第28页 |
| ·酶切反应 | 第28页 |
| ·连接反应 | 第28-29页 |
| ·连接产物转化宿主大肠杆菌 | 第29页 |
| ·重组子的快速鉴定 | 第29页 |
| ·质粒抽提 | 第29页 |
| ·鉴定 | 第29页 |
| 7.BAC-TDN-GD大容量打靶载体的构建 | 第29-31页 |
| ·实验设计 | 第29-30页 |
| ·质粒共转化宿主大肠杆菌 | 第30页 |
| ·BAC抽提 | 第30页 |
| ·酶切反应 | 第30页 |
| ·连接反应 | 第30页 |
| ·电击转化大肠杆菌 | 第30-31页 |
| ·鉴定 | 第31页 |
| 三.结果与分析 | 第31-41页 |
| 1.奶牛rRNA基因家族的克隆 | 第31-33页 |
| ·奶牛rRNA基因复杂DNA序列的扩增 | 第31-32页 |
| ·奶牛rRNA基因复杂DNA序列的克隆与鉴定 | 第32-33页 |
| ·奶牛rRNA基因复杂DNA序列的测序 | 第33页 |
| ·小结 | 第33页 |
| 2.pYLSV-TDN筛选载体的构建 | 第33-35页 |
| ·PCR扩增 | 第33-34页 |
| ·载体鉴定 | 第34-35页 |
| 3.BAC-TDN大容量筛选载体的构建 | 第35页 |
| 4.pYLVS-GD表达载体的构建 | 第35-38页 |
| ·PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·pYLVS-GD表达载体的鉴定 | 第36-38页 |
| 5.BAC-TDN-GD大容量打靶载体的构建 | 第38-40页 |
| ·BAC-TDN-VS-GD质粒的鉴定 | 第38-39页 |
| ·BAC-TDN-GD的鉴定 | 第39-40页 |
| 6.小结 | 第40-41页 |
| 四.讨论 | 第41-53页 |
| 1.GC含量高的复杂DNA序列的扩增与克隆策略 | 第41-43页 |
| 2.基因打靶定点整合的原理与基因打靶载体的构建策略 | 第43-46页 |
| 3.rRNA基因间的间隔序列作为基因打靶靶位点的意义 | 第46-47页 |
| 4.基于BAC重组酶系统构建打靶载体的意义 | 第47-49页 |
| 5.大分子量载体的操作 | 第49-51页 |
| 6.奶牛多位点基因打靶的意义 | 第51页 |
| 7.应用前景 | 第51-53页 |
| 五.结论 | 第53-54页 |
| 六.附录 | 第54-68页 |
| 附录1 奶牛rRNA基因家族全序列 | 第54-58页 |
| 附录2 打靶载体BAC-TDN-GD全序列 | 第58-68页 |
| 七.参考文献 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70页 |