| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 图表清单 | 第11-13页 |
| 第一章 序言 | 第13-33页 |
| ·嗜热菌 | 第13-15页 |
| ·芽孢杆菌中的嗜热类群 | 第15-16页 |
| ·耐高温蛋白酶简介 | 第16-19页 |
| ·解旋酶简介 | 第19-31页 |
| ·解旋酶的分类 | 第20-22页 |
| ·解旋酶的结构和功能 | 第22-24页 |
| ·解旋酶和RecA折叠 | 第24-25页 |
| ·解旋酶作用机制 | 第25-30页 |
| ·解旋酶的应用 | 第30-31页 |
| ·耐热蛋白的热稳定性分析 | 第31页 |
| ·研究的目的和意义 | 第31-33页 |
| 第二章 高温蛋白酶Pgsey的初步研究 | 第33-46页 |
| ·材料与方法 | 第33-40页 |
| ·培养基 | 第33页 |
| ·分离及筛选产蛋白酶的菌株 | 第33页 |
| ·测定产蛋白酶菌株的生长温度范围 | 第33-34页 |
| ·感受态细胞的制作 | 第34页 |
| ·扩增及测序产蛋白酶菌株的16S rDNA基因 | 第34-36页 |
| ·产蛋白酶菌株系统进化树的构建与分析 | 第36-37页 |
| ·酶活力的测定方法 | 第37-38页 |
| ·分离与纯化蛋白酶 | 第38-39页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第39页 |
| ·蛋白酶最适催化温度的测定 | 第39页 |
| ·蛋白酶最适催化pH的测定 | 第39-40页 |
| ·金属离子对蛋白酶活性的影响 | 第40页 |
| ·酶抑制剂和有机溶剂对酶活性的影响 | 第40页 |
| ·实验结果 | 第40-44页 |
| ·产酶菌株GSEY01生长特性 | 第40页 |
| ·产酶菌株的系统进化分析 | 第40-41页 |
| ·蛋白酶Pgsey的分离与纯化 | 第41-42页 |
| ·蛋白酶Pgsey最适温度和pH | 第42-43页 |
| ·金属离子对蛋白酶Pgsey活性的影响 | 第43-44页 |
| ·酶抑制剂和有机溶剂对蛋白酶Pgsey活性的影响 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 高温菌Thermus TC16解旋酶基因克隆及其生物信息学分析 | 第46-64页 |
| ·材料与方法 | 第46页 |
| ·细菌、质粒和引物 | 第46页 |
| ·培养基 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-52页 |
| ·高温菌Thermus TC16的培养 | 第46-47页 |
| ·高温菌Thermus TC16基因组的提取 | 第47页 |
| ·引物设计 | 第47页 |
| ·PCR扩增高温菌Thermus TC16解旋酶基因 | 第47-48页 |
| ·PCR产物的胶回收 | 第48页 |
| ·TC16解旋酶克隆质粒的构建 | 第48-49页 |
| ·菌落PCR检测阳性克隆 | 第49-50页 |
| ·BLAST序列比对 | 第50页 |
| ·分子进化分析 | 第50-51页 |
| ·蛋白质结构和功能预测分析 | 第51-52页 |
| ·模体(motif)分析 | 第52页 |
| ·Swiss-Model Workspace:同源建模服务器分析 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-62页 |
| ·Thermus TC16的培养及其基因组的提取 | 第52-53页 |
| ·PCR扩增高温菌TC16解旋酶基因 | 第53-54页 |
| ·测序结果及分析 | 第54-56页 |
| ·解旋酶Htc16蛋白进化进化分析 | 第56-59页 |
| ·保守序列熵值分析 | 第59-61页 |
| ·同源建模结果 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 第四章 解旋酶Htc16重组蛋白的初步表达 | 第64-75页 |
| ·材料 | 第64页 |
| ·细菌和质粒 | 第64页 |
| ·培养基 | 第64页 |
| ·方法 | 第64-71页 |
| ·栖热菌TC16的培养及其基因组的提取 | 第64-65页 |
| ·引物设计与合成 | 第65页 |
| ·PCR扩增高温菌TC16解旋酶基因 | 第65-66页 |
| ·PCR产物的胶回收 | 第66页 |
| ·PCR产物双酶切 | 第66页 |
| ·pET 28a质粒双酶切 | 第66-67页 |
| ·连接 | 第67-68页 |
| ·重组质粒转化E.coli DH5a | 第68页 |
| ·双酶切鉴定阳性克隆 | 第68-69页 |
| ·重组质粒转化E.coli BL21(DE3) | 第69页 |
| ·解旋酶Htc16重组蛋白的表达 | 第69-70页 |
| ·表达蛋白可溶性分析 | 第70页 |
| ·SDS-PAGE分析蛋白分子量 | 第70-71页 |
| ·结果 | 第71-73页 |
| ·PCR扩增高温菌TC16解旋酶基因 | 第71页 |
| ·pET28a-htc16表达质粒的构建 | 第71-72页 |
| ·Htc16重组蛋白的表达 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73-75页 |
| 第五章 总结与展望 | 第75-77页 |
| ·总结 | 第75-76页 |
| ·展望 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-83页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第83-84页 |
| 附录B 试验常用药品及仪器 | 第84-90页 |
| B.1 主要培养基配方 | 第84-85页 |
| B.2 主要溶液及其配制 | 第85-88页 |
| B.3 主要仪器 | 第88-89页 |
| B.4 试剂及酶制品 | 第89-90页 |
