| 独创声明 | 第1页 |
| 学位论文版权使用授权书 | 第3-4页 |
| 摘 要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 缩 略 语 | 第9-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-39页 |
| 1 前言 | 第13-29页 |
| ·文昌鱼－研究脊椎动物起源和进化的模式动物 | 第14-15页 |
| ·文昌鱼作为研究脊椎动物起源和进化的模式动物的依据 | 第15-24页 |
| ·文昌鱼部分发育相关基因的研究进展 | 第24-29页 |
| 2 NifU-like 蛋白研究进展 | 第29-36页 |
| ·固氮酶概述 | 第29-30页 |
| ·固氮酶作用机制 | 第30-31页 |
| ·固氮酶－古老的酶系 | 第31-32页 |
| ·固氮基因（nif 基因）研究进展 | 第32-33页 |
| ·NifU-like 及NifU 研究概况 | 第33-36页 |
| 3. 本文研究目的以及采用的技术路线 | 第36-39页 |
| ·研究目的 | 第36-38页 |
| ·技术路线 | 第38-39页 |
| 第二章 文昌鱼nifU-like 基因的克隆，表达与进化分析 | 第39-70页 |
| 1 前言 | 第39-40页 |
| 2 材料与方法 | 第40-56页 |
| ·文昌鱼肠cDNA 文库的构建和测序 | 第40页 |
| ·序列比较与系统进化分析 | 第40-41页 |
| ·RT-PCR | 第41-46页 |
| ·成体文昌鱼精巢和卵巢总RNA 的制备 | 第41-42页 |
| ·引物设计 | 第42页 |
| ·RT-PCR 反应体系 | 第42页 |
| ·RT-PCR 反应条件 | 第42-43页 |
| ·RT-PCR 产物的回收纯化 | 第43-44页 |
| ·RT-PCR 纯化产物的连接转化 | 第44-45页 |
| ·测序 | 第45-46页 |
| ·Northern blot | 第46-53页 |
| ·RNA 探针的合成和标记效率检测 | 第46-49页 |
| ·去除消化道的成体文昌鱼的总RNA 的制备 | 第49-50页 |
| ·甲醛电泳 | 第50-51页 |
| ·转膜 | 第51-52页 |
| ·杂交 | 第52页 |
| ·杂交后洗膜及检测 | 第52-53页 |
| ·切片原位杂交分析nifU-like 基因在成体文昌鱼组织中的表达 | 第53-56页 |
| 3 结果 | 第56-66页 |
| ·青岛文昌鱼nifU-like 基因的克隆 | 第56-57页 |
| ·青岛文昌鱼nifU-like 基因的序列分析 | 第57-60页 |
| ·系统进化分析 | 第60-61页 |
| ·nifU-like 基因在文昌鱼中存在的证据 | 第61-64页 |
| ·RT－PCR | 第61-62页 |
| ·Northern blot | 第62-64页 |
| ·切片原位技术分析nifU-like 基因在成体组织中的表达 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-70页 |
| ·文昌鱼nifU-like 基因的鉴定 | 第66页 |
| ·文昌鱼nifU-like 基因的保守性及进化分析 | 第66-68页 |
| ·nifU-like 基因的功能探讨 | 第68-70页 |
| 总结与展望 | 第70-79页 |
| 附录 | 第79-82页 |
| （一） pcDNA3 的质粒图谱 | 第79-80页 |
| （二） 载体pcDNA3-SfiI 的构建 | 第80-81页 |
| （三） 文昌鱼基因组nifU-like 基因测序图 | 第81-82页 |
| 致 谢 | 第82页 |
